[发明专利]一种系数转换法定量检测核桃不同部位总黄酮的方法

说明书

本发明涉及一种系数转换法定量检测核桃不同部位总黄酮的方法。该方法主要包括以下步骤：1)对照品溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)采用UPLC‑UV对水解后主要苷元进行含量测定；4)通过系数转换法计算总黄酮。本发明建立的检测方法具有简便、快速、灵敏度高、专属性强、重复性好的优点，并成功地应用于核桃不同部位的总黄酮的含量测定。本发明不仅为核桃质量标准的制定提供理论依据，为研究人员和生产者提供了关键信息，同时为更好地开发和利用核桃资源提供了研究基础。

技术领域

本发明涉及一种系数转换法定量检测核桃不同部位总黄酮的方法。

背景技术

核桃(Juglans regia L.)是胡桃科(Juglandaceae)核桃属(Juglans)落叶乔木，核桃仁、分心木、青皮、叶、花、壳等均可入药。《全国中草药汇编》中记载“核桃叶，别名胡桃叶，本品为胡桃科植物胡桃Juglans regia L.的叶，多鲜用，随用随采，用于象皮肿，白带过多，疥癣”。

研究表明，核桃叶中含有较高含量的黄酮类物质，是黄酮类化合物的良好来源，并且黄酮类化合物是青龙衣的主要化学成分，在分心木中黄酮类是其主要成分之一，核桃壳和核桃仁中均有黄酮类化合物。黄酮具有较强的抗氧化作用，与调节免疫功能和增强抗癌活性密切相关，因此对核桃不同部位总黄酮的含量测定是有必要的。

目前总黄酮的含量测定多采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法，但该方法的测定过程中可能会有杂质在设定波长处有紫外吸收，影响最终结果；此外，中药成分复杂，黄酮苷类成分较难获得，无法直接通过获取所有黄酮类成分的对照品进行总黄酮的定量。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本申请提供一种简单易得的系数转换法定量检测核桃不同部位总黄酮的方法。

一种系数转换法定量检测核桃不同部位总黄酮的方法，步骤包括：

(1)对照品溶液的制备；

(2)供试品溶液的制备；

(3)采用UPLC-UV对水解后主要苷元进行含量测定；

(4)通过系数转换法计算总黄酮。

进一步的，步骤(3)中所述主要苷元包括：槲皮素与山奈酚。

进一步的，步骤(1)中所述对照品溶液的制备，包括：精密称取槲皮素、山奈酚标准品适量，分别以甲醇溶解，均配制成单独的标准储备液；分别精密量取标准储备液适量，用甲醇稀释制备混合工作溶液；从混合工作溶液中连续稀释得到浓度为1、2、5、10、50、100、250μg/mL的槲皮素、山奈酚的混合标准系列溶液。

进一步的，步骤(2)中所述供试品溶液的制备，包括：称取待测核桃样品0.5g，置于具塞试管中，精密量取10.00mL 50％甲醇，于室温下在超声波清洗仪中超声15min，放冷，采用高速冷冻离心机离心10min，取上清液2.00mL，于55℃下旋蒸，放冷至室温；取2.00mL纯甲醇复溶，并加入0.40mL 37％的盐酸，55℃下冷凝回流水解1h，放冷；加入1.60mL纯甲醇，混匀，再经0.22μm滤膜过滤，取续滤液，得供试品溶液。

进一步的，步骤(4)中所述采用UPLC-UV对水解后主要苷元进行含量测定，其中液相色谱条件如下

有益效果：

本发明提供的样品前处理方法操作简单。供试品溶液的制备只需以50％甲醇为提取溶剂，料液比为1：20，室温超声15min后离心并取一定体积旋蒸，加入甲醇和盐酸复溶后即可进行酸水解分析。此样品前处理过程提取效率高，样品分析干扰少；