[发明专利]一种酶催化制备淫羊藿次甙II的方法

权利要求书

1.一种酶催化制备淫羊藿次甙II的方法，其特征在于：其酶催化制备淫羊藿次甙II方法的步骤如下：

(1)淫羊藿甙酶催化底物：按质量比为1：2～5将淫羊藿甙粗产物加入甲醇中，加热至65～100℃，在200～750r/min的搅拌速率下回流搅拌4～10h，然后将产物冷却至50℃以下，过滤收集滤饼，将其在50～80℃下干燥得到淫羊藿甙酶催化底物；

(2)淫羊藿甙酶催化水解：将步骤(1)得到的淫羊藿甙酶催化底物加入到20％的乙醇中，用盐酸调节pH在5.5～6.5之间，加热至50～80℃，在200～750r/min的搅拌速率下搅拌10～30min；同时，将反式糖苷水解酶溶解在纯水中，之后以1.0～5.0kg/min的速率加入淫羊藿甙酶催化底物体系中，在200～750r/min的搅拌速率下搅拌10～60min；然后停止搅拌，在50～80℃下静止反应8-20h；最后将反应产物过滤并收集滤饼，在50～80℃下干燥得到淫羊藿次甙Ⅱ粗产品；

其中：反式糖苷水解酶：纯水：淫羊藿甙酶催化底物：20％乙醇水溶液的质量比为1：5～20：10～40：300～800；

(3)淫羊藿次甙Ⅱ的提纯：将步骤(2)制备得到的淫羊藿次甙Ⅱ粗产品用乙酸乙酯进行重结晶3～5次，得到99％以上含量的淫羊藿次甙Ⅱ纯品。

2.根据权利要求1所述的酶催化制备淫羊藿次甙II的方法，其特征在于：其反式糖苷水解酶的基因序列为SEQ ID No.1所示基因序列，或其基因序列与SEQ ID No.1所示的基因序列具备95％以上的同源性且能水解淫羊藿甙成淫羊藿次甙Ⅱ的水解酶的基因序列。

3.根据权利要求1所述的酶催化制备淫羊藿次甙II的方法，其特征在于：其反式糖苷水解酶的氨基酸序列具备98％以上的同源性且能水解淫羊藿甙成淫羊藿次甙Ⅱ的水解酶。

4.根据权利要求1所述的酶催化制备淫羊藿次甙II的方法，其特征在于：其反式糖苷水解酶的细胞选自基因工程改造的酵母菌或大肠杆菌。