[发明专利]一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞

说明书

本发明公开了一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞，属于分子生物技术领域，所述嵌合型抗原受体包括胞外区，所述胞外区包括间隔区，所述间隔区的核心铰链区氨基酸序列为Core Hinge‑Y1：CDKTYTCPPCP或Core Hinge‑Y2：CDKTSTCPPCP。通过在嵌合型抗原受体在核心铰链区的极性带正电的组氨酸，替换为中性不带电的丝氨酸或者酪氨酸，获得抗氧化嵌合型抗原受体；经数据证实，本发明的嵌合型抗原受体和免疫细胞具有抗氧化性、较强的肿瘤细胞杀伤作用或抗肿瘤作用。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，具体涉及一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞。

背景技术

随着全球环境因素的不断恶化，无论发达国家或发展中国家，恶性肿瘤的发病率和死亡率均呈上升趋势，恶性肿瘤已成为人类生命健康的最大危害。2020年，中国每年约有550万新发癌症病例，其中死亡人数达400万。

嵌合抗原受体免疫细胞是一种杀伤肿瘤的新型精准靶向免疫细胞，近几年通过优化改良在肿瘤杀伤上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效的方式。嵌合抗原受体免疫细胞包括CAR-T、CAR-NK、CAR-B以及CAR-MP(CAR-macrophage，CAR-巨噬细胞)，是一种以嵌合型抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)为基础的免疫细胞。通过体外基因转移技术，将编码特异的嵌合抗原受体的基因序列转导入免疫细胞，生成可以结合靶抗原的肿瘤特异性T细胞。

目前CAR-T细胞对治疗血液肿瘤效果显著，如针对急性B淋巴母细胞白血病和针对难治性/复发性非何杰金氏淋巴瘤的Yescarta已在美国上市。但免疫细胞如CAR-T细胞对实体瘤的杀伤效果，远不如血液肿瘤。可能与实体瘤的肿瘤微环境(TumorMicroenvironment，TME)影响CAR-T细胞外结构稳定性和完整性有关，如局部富集活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)降解CAR的spacer，破坏CAR-T与肿瘤细胞表面的抗原结合，从而使CAR-T失去对肿瘤细胞的攻击作用。而低氧(hypoxia)是实体瘤微环境的主要特征，导致产生局部ROS富集，促进肿瘤细胞生长。

发明内容

针对现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞，通过提高嵌合型抗原受体和免疫细胞的抗氧化性，提高稳定性。

本发明公开了一种抗氧化嵌合型抗原受体，包括胞外区，所述胞外区包括间隔区，所述间隔区的核心铰链区氨基酸序列为Core Hinge-Y1：CDKTYTCPPCP(SEQ ID NO：3)或Core Hinge-Y2：CDKTSTCPPCP(SEQ ID NO：4)。

优选的，本发明的嵌合型抗原受体还包括跨膜区和胞内区，所述胞外区还包括单链抗体，所述间隔区两端连接所述跨膜区和单链抗体，所述跨膜区与所述胞内区连接，所述间隔区为免疫球蛋白G的常链片段。

优选的，所述间隔区的基因序列为IgG HCH3-Y1 cDNA(SEQ ID NO：6)或IgG HCH3-Y2 cDNA(SEQ ID NO：7)。

本发明还提供一种表达上述嵌合型抗原受体的免疫细胞。

优选的，所述免疫细胞包括CAR-T细胞、CAR-NK细胞、CAR-B细胞或CAR-MP细胞。

优选的，所述免疫细胞应用于杀伤肿瘤细胞。

优选的，所述免疫细胞应用于杀伤实体瘤细胞或血液肿瘤细胞。

优选的，所述免疫细胞的制备方法包括：

合成嵌合型抗原受体的cDNA；

用所述cDNA制备慢病毒质粒；

通过慢病毒质粒制备慢病毒颗粒；