[发明专利]用于检测日本血吸虫DNA试剂盒以及使用方法

权利要求书

1.一种基于重组酶介导等温核酸扩增方法检测日本血吸虫DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括反应体系以及侧流层析试纸；

所述反应体系包括引物组、探针、缓冲液以及纯化水；

所述侧流层析试纸设有检测部、检测线以及质控线，所述检测部包被有带FAM抗体的胶体金颗粒，所述检测线包被有生物素抗体，所述质控线包被有荧光素抗体；

所述引物组由上游引物以及下游引物组成，所述上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；

所述探针为如SEQ ID No.3所示序列经修饰获得；

所述反应体系包括以下体积份数的组分：

缓冲液 22.5~27.5 体积份数；

上游引物 1.89~2.31 体积份数；

下游引物 1.89~2.31 体积份数；

探针 0.54~0.66 体积份数；

纯化水 15.03~18.37 体积份数；

所述上游引物的浓度为10μM， 所述下游引物的浓度为10μM，所述探针的浓度为10μM；

每份所述反应体系的体积为41.85~51.15 μL；

所述上游引物、所述下游引物以及所述探针以冻干粉的形式设置在所述试剂盒中；

所述探针的5’端标记FAM基团，3’端标记阻断物，内部使用四氢呋喃残基修饰；

该试剂盒的使用方法包括以下步骤：

准备四个反应单元管，标记为1、2、3、4，每个反应单元管中加入一份反应体系，混匀，短暂离心后将反应体系的液体收集至反应单元管底部；

向每个反应单元管加入2.5μL乙酸镁溶液，每个反应单元管中分别加入1μL的灭菌水、1μL 10copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28、1μL 10²copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28、1μL 10³copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28；

使用恒温振荡混匀仪震荡混匀后保温4min，将反应单元管置于39℃水浴锅中进行等温扩增，反应15min；

取10μL等温扩增的产物与90μL的PBS缓冲液混合，制得待测试液；

将侧流层析试纸的检测部插入待测试液中30s～60s后，将侧流层析试纸平放1.0min～2.0min，等待红色条带出现，根据侧流层析试纸的显色情况直接读取检测结果；

检测结果显示，阴性对照灭菌水试样只出现质控线显色，而10copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28试样、10²copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28试样和10³copies/μL的日本血吸虫重组质粒SjG28试样的扩增产物分别同时出现质控线和检测线显色。