[发明专利]一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法

权利要求书

1.一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）标准溶液配置：准确称取驴源多肽A1、驴源多肽A2对照品各10 mg，分别置于10 mL容量瓶，用1%碳酸氢铵溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的驴源多肽A1、驴源多肽A2标准储备液；准确称取驴源多肽A1、驴源多肽A2同位素内标各10 mg，分别置于10mL容量瓶，用1%碳酸氢铵溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL 的驴源多肽A1同位素、驴源多肽A2同位素标准储备液，-18℃保存；分别准确吸取驴源多肽A1、驴源多肽A2标准储备液各200 μL于10mL容量瓶，1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制成浓度为20 μg/mL混合标准工作溶液；分别准确吸取驴源多肽A1同位素、驴源多肽A2同位素标准储备液各100 μL于10 mL容量瓶，1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL混合内标工作溶液；

（2）标准曲线制备：分别准确移取混合标准工作溶液，分别加入混合内标工作溶液，用1%碳酸氢铵溶液稀释，配制成浓度为20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL的系列标准溶液，内标浓度均为200 ng/mL，供液相色谱-串联质谱测定；

（3）试样处理：称取混匀后的试样2.0 g，置于10 mL容量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液溶解并稀释至刻度，准确吸取1.00 mL于15 mL离心管中，加胰蛋白酶溶液1.0 mL，再加入混合内标工作溶液100 μL，用1%碳酸氢铵溶液稀释至5 mL，摇匀，置于恒温箱中，于37℃恒温酶解16小时，取出，冷却至室温，经0.22 μm滤膜过滤，采用液相色谱-质谱法进行检测。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述驴源多肽A1氨基酸序列为GPAGPTGPVGK；所述驴源多肽A2氨基酸序列为GEAGAAGPAGPAGPR；所述驴源多肽A1同位素氨基酸序列为G(15N)PA(15N)GPTGPVGK；所述驴源多肽A2同位素氨基酸序列为G(15N)EA(15N)GAAGPAGPAGPR。

3. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述液相色谱的条件为：C₁₈（100 mm×1 mm，5 μm），流速：0.3 mL/min；柱温：30℃；进样量：2 µL；流动相：A相：0.1%甲酸水，B相：0.1%甲酸乙腈，梯度洗脱。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述梯度洗脱为分段洗脱，第一段洗脱条件为：0-2min，95%A+5%B；2-5min，50%A+50%B；5-7min，30%A+70%B；7-10min，95%A+5%B；第二阶段洗脱条件为：0-3min，80%A+20%B；3-5min，60%A+40%B；5-8min，55%A+45%B；8-10min，20%A+80%B。

5.根据权利要求1-4任一项所述的鉴定方法，其特征在于，所述质谱的条件为：离子源：电喷雾（ESI）；扫描方式：正离子； 检测方式：多反应监测；毛细管电压：3.5 kV；二级锥孔电压：3.0 V；离子源温度：140℃；脱溶剂气温度：350 ℃；脱溶剂气流量：800L/h；锥孔反吹气流量：50 L/h；定性离子对、定量离子对及碰撞能量如下所示：

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