[发明专利]1,2,4-三氨基苯的新用途

说明书

本申请公开了1,2,4‑三氨基苯的新用途，具体包括1,2,4‑三氨基苯作为荧光探针在定性检测细胞或组织内pH值中的应用以及1,2,4‑三氨基苯作为荧光探针定性检测氨气中的应用，所述定性检测细胞内pH值包括以下步骤：提供1,2,4‑三氨基苯，加入培养基中混合均匀，用所述培养基对细胞进行孵育，孵育一段时间后将所述细胞置于荧光共聚焦显微镜下进行观察。本申请提供的荧光探针的制备方法简单，反应灵敏。

技术领域

本申请涉及分析化学技术领域，特别是涉及1,2,4-三氨基苯的新用途。

背景技术

细胞内pH值是细胞新陈代谢的重要参数之一，在维持细胞生长、增殖、凋亡及信号传导等正常生理过程中起着关键性作用。目前，检测细胞内pH的方法包括微电极法、吸收光谱法、核磁共振法等，但存在机械损伤、价格昂贵等缺点。而荧光检测法具有高灵敏度、波长可调节、能反映现象或事物随时间与空间变化细节的能力即高时空分辨率等特点，有助于实现细胞、组织内pH等信息的原位观察及可视化检测。

氨气是一种无色具有强烈刺激性臭味的有毒、易燃气体，容易损害人体的神经系统和内脏器官等，因此，对氨气进行灵敏、快速的实时实地检测，具有极大的实用意义。检测氨气的传统方法有比色法和电化学法，操作较为繁琐，不易携带等缺点。荧光探针传感检测法是一种新型的检测方法，具有直观快捷、操作简便、检测灵敏度高和准确度高等优点。目前，纸基型的荧光探针能够快速检测氨气，但在进行检测前需要将氨气富集于溶液中，才可进行显色反应，对环境中氨气的检测存在一定的局限性。

发明内容

本申请针对现有技术问题，以1,2,4-三氨基苯作为简单的、反应灵敏的荧光探针用于直接、快速地检测细胞内pH和环境中的氨气。

本申请提供了1,2,4-三氨基苯作为荧光探针在定性检测细胞或组织内pH值中的应用。

1,2,4-三氨基苯是合成细胞钾离子通道的有效开放剂的前体，通过复杂的衍生化过程得到的1,2,4-三氨基苯衍生物，其对细胞的生物毒性较高，由于1,2,4-三氨基苯本身也能够穿透细胞，可直接作为荧光探针检测细胞内pH值，且其对细胞的生物毒性较低，而且能够实时快捷、高效地对组织或细胞内pH值进行有效地分析检测。

所述细胞是指人或动物离体培养的细胞，尤其是指人的细胞，可以是正常细胞或病变细胞，可选的，所述细胞为A549肺癌细胞、Hela人宫颈癌细胞。

与正常细胞相比，病变细胞的生理生化功能发生改变，代谢活动有很大变化，造成细胞内的pH值发生变化，所述应用为监测细胞的病变过程。

所述定性检测细胞内pH值是指检测细胞内pH值的变化或者不同细胞之间的pH值差异，而不是检测其具体数值。

可选的，所述定性检测细胞内pH值包括以下步骤：

提供1,2,4-三氨基苯，加入培养基中混合均匀，用所述培养基对细胞进行孵育，孵育一段时间后将所述细胞置于荧光共聚焦显微镜下进行观察。

细胞通过培养基孵育，进行活化和传代，培养基中1,2,4-三氨基苯在细胞孵育过程中透过细胞膜进入细胞质内；细胞外部环境pH值的改变往往会引起细胞质pH的变化，细胞间质内的1,2,4-三氨基苯在不同pH值条件下会发生颜色变化，通过荧光共聚焦显微镜能够检测1,2,4-三氨基苯的荧光强度，了解细胞内的pH值的变化。所述孵育的载体一般为培养皿，在用探针溶液孵育前，需要用普通培养基进行孵育，使细胞贴壁，然后再用含有荧光探针的培养基进行替换孵育。

孵育时间一般以1,2,4-三氨基苯充分进入细胞内部为准，该时间一般为1-5小时。

可选的，所述细胞孵育后先进行固定；接着利用细胞核染料对细胞进行染色；最后将所述细胞置于荧光显微镜下进行观察。