[发明专利]锁式探针和试剂盒及基因扩增方法

说明书

本申请涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种锁式探针和试剂盒及基因扩增方法。该锁式探针包括：5’端检测臂序列，3’端检测臂序列，位于5’端检测臂序列和3’端检测臂序列之间的分子标签序列、引物结合区序列和荧光探针结合区序列；其中，5’端检测臂序列和3’端检测臂序列与靶标序列互补，引物结合区序列与反向的通用引物对互补、且与反向的高通量测序接头引物对的部分序列互补；当5’端检测臂序列和3’端检测臂序列与靶标序列结合时，3’端检测臂序列的末端碱基与靶标序列的待测位点对齐。该锁式探针可以兼容多平台检测靶标序列，不仅特异性强，而且灵敏度高，可以根据实际需求灵活应用于临床，降低检测成本，具有很好的应用前景。

技术领域

本申请属于基因检测技术领域，尤其涉及一种锁式探针和试剂盒及基因扩增方法。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定脱氧核糖核酸(DNA)片段的分子生物学技术，可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的特点是能将微量的DNA大幅增加，但是特异性不强。

锁式探针(Padlock Probe)是一种较长的单链寡核苷酸片段，其5’端和3’端两末端和靶标序列互补，中间连接序列对检测结果没有影响，可以作为通用引物的结合位点。目前基于锁式探针的靶向检测均需要进行滚环扩增，而且用于检测靶标序列时，锁式探针难以兼容多平台检测，而且灵敏度低，难以灵活应用于不同环境的检测需求。因此，相关技术有待改进。

发明内容

本申请的目的在于提供一种锁式探针和试剂盒及基因扩增方法，旨在解决如何提高锁式探针在不同检测平台检测的兼容性和灵敏度的技术问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种锁式探针，用于检测靶标序列，所述锁式探针包括：

5’端检测臂序列，3’端检测臂序列，位于所述5’端检测臂序列和所述3’端检测臂序列之间的分子标签序列、引物结合区序列和荧光探针结合区序列；其中，所述5’端检测臂序列和所述3’端检测臂序列与所述靶标序列互补，所述引物结合区序列与反向的通用引物对互补、且与反向的高通量测序接头引物对的部分序列互补；

当所述5’端检测臂序列和所述3’端检测臂序列与所述靶标序列结合时，所述3’端检测臂序列的末端碱基与所述靶标序列的待测位点对齐。

本申请提供一种适用于多平台检测的锁式探针，该锁式探针的序列包括5’端检测臂序列，3’端检测臂序列，以及位于该5’端检测臂序列和3’端检测臂序列之间的分子标签序列、引物结合区序列和荧光探针结合区序列；因其含有荧光探针结合区序列，且引物结合区序列与反向的通用引物对互补，同时又与反向的高通量测序接头引物对的部分序列互补，这样的锁式探针用于检测靶标序列时，既可以结合通用引物对进行常规PCR扩增检测靶标序列，也可以结合高通量测序接头引物对进行文库扩增以高通量检测靶标序列，同时也可以结合荧光探针进行荧光定量PCR检测，另外也可以基于微流控和数字PCR技术进行扩增检测，因此该锁式探针可以兼容多平台检测靶标序列，不仅特异性强，而且灵敏度高，可以根据实际需求灵活应用于临床，降低检测成本，具有很好的应用前景。

第二方面，本申请提供一种试剂盒，用于检测靶标序列，所述试剂盒包括本申请的上述锁式探针。

本申请提供的试剂盒含有本申请特有的锁式探针，因此该试剂盒可以基于该锁式探针兼容多平台检测靶标序列，不仅特异性强，而且灵敏度高，可以根据实际需求灵活应用于临床，降低检测成本。

第三方面，本申请提供一种基因扩增方法，包括如下步骤：

提供核酸样本；

将本申请上述锁式探针与所述核酸样本混合，然后进行退火处理；

当所述锁式探针与靶标序列结合：