[发明专利]血清的制备方法

说明书

本发明涉及一种血清的制备方法。该制备方法包括以下步骤：将血浆与可溶性钙盐混合，制备混合溶液，其中，血浆的体积与可溶性钙盐的质量之比为1mL：(2.28mg～3.28mg)；将混合溶液反复冻融后，在7741g～11325g条件下离心，取上清；及对反复冻融后离心所得的上清进行除菌处理，制备血清。上述血清的制备方法的得率高，血浆中总蛋白的回收率高，不额外引入钠离子，应用于吖啶酯作为标记物的化学发光检测时，准确性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种血清的制备方法。

背景技术

纤维蛋白原(Fibrinogen，又称为血纤维蛋白原)是由肝细胞合成和分泌的一种糖蛋白，具有凝血功能，是血浆中含量最高的凝血因子。纤维蛋白原的分子量约为340kDa，为共价二聚体，每个亚基含有α、β和γ三条肽链，分别由610、461及410个氨基酸残基构成，各肽链彼此通过二硫键相互连接。两个亚基在肽链N-末端附近再通过三对二硫键将对称的两个亚基连结起来而形成中间球状物，中间球状物包含2条α链、2条β链和2条γ链的6个N-末端，6条肽链的N-末端交错在一起，形成两股“卷取螺旋”结构。在凝固过程中，血凝酶切断纤维蛋白原α链N-末端区域的纤维蛋白肽A和β链N-末端区域的纤维蛋白肽B而生成纤维蛋白单体，纤维蛋白单体以交错重叠状态侧向聚合，最终形成由成熟纤维蛋白网络构成的血凝块。

血清指纤维蛋白原已被除去的血浆，主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤和对培养中的细胞起到某些保护作用等。由于血清的杂质较少，干扰较小，常用于校准品和稀释液的配制，是体外诊断试剂行业中是重要的原料之一。

在血液采集过程中，通常血液采集管中都会预置草酸盐、乙二胺四乙酸盐或枸橼酸盐等抗凝物质，乙二胺四乙酸盐或枸橼酸盐会与血液中的钙离子结合生成稳定的螯合物而使凝血中止。因此，传统的血清制备方法是血浆复钙法，即在含有草酸盐、乙二胺四乙酸盐或枸橼酸盐等抗凝物质的血液中重新加入过量的钙离子而使得凝血继续并快速进行，待反应结束后加入草酸钠沉淀过量的钙离子，最后离心，从而得到血清。然而，按照传统的血清制备方法制得的血清应用于吖啶酯作为标记物的化学发光检测时，准确性较差。

近些年，也出现了将血浆直接在56℃条件下加热而制备血清的方法，然而，在56℃条件下，血浆中的部分蛋白的结构容易发生变化，甚至变性，所以采用这种方法制备的血清的总蛋白回收率较低，血清的整体质量较差，应用于体外诊断检测时准确性也同样较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种血清的制备方法，以改善传统的血清制备方法制备的血清应用于吖啶酯作为标记物的化学发光检测时准确性较差问题。

一种血清的制备方法，包括以下步骤：

将血浆与可溶性钙盐混合，制备混合溶液，其中，所述血浆的体积与所述可溶性钙盐的质量之比为1mL：(2.28mg～3.28mg)；

将所述混合溶液反复冻融后，在8000rpm～10000rpm条件下离心，取上清；及

对反复冻融后离心所得的上清进行除菌处理，制备血清。

经本申请研究发现，在传统的血清制备方法中，采用草酸钠去除过量钙离子的方式使得血清中额外引入了钠离子，而这部分额外引入的钠离子会干扰吖啶酯发光信号，进而使得按照传统的血清制备方法制得的血清应用于吖啶酯作为标记物的化学发光检测时准确性较低。而上述血清的制备方法通过优化可溶性钙盐的加入量，并结合反复冻融，避免了额外引入钠离子，使得制得的血清应用于吖啶酯作为标记物的化学发光检测时准确性高，同时上述血清的制备方法还提高了制得的血清中的总蛋白含量、总蛋白的回收率及血清的得率。

在其中一个实施例中，所述可溶性钙盐选自氯化钙、硝酸钙及硫酸钙中的至少一种。