[发明专利]分泌抗Wnt-7a单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗、应用

说明书

本发明提供了分泌抗Wnt‑7a单克隆抗体杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株为1B8A2和/或4G6F3。本发明还提供了上述的分泌抗Wnt‑7a单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，单克隆抗体的抗原表位处于Wnt‑7a蛋白的C端或Wnt‑7a蛋白的M段，处于Wnt‑7a蛋白的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；处于Wnt‑7a蛋白的M段的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。本发明特异性强且灵敏度高，可通过配对检测体液、组织中Wnt‑7a蛋白含量，应用于检测Wnt‑7a蛋白过量表达或诊断以Wnt‑7a蛋白异常表达为表征的疾病的产品的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及Wnt-7a单克隆抗体杂交瘤细胞株。

背景技术

Wnt蛋白家族由19个分泌糖蛋白组成，主要通过与 Frizzled(Fzd)受体结合参与细胞的增殖、分化及肿瘤生长等多种生物学过程。其中，Wnt-7a （即Wnt7a）属于 Wnt 家族中的经典 Wnt 信号分子,通过经典的 Wnt / β-catenin 信号过程参与多种恶性肿瘤的发生发展。Wnt-7a的分子量为39kDa，含有349个氨基酸，在分泌之前剪切为含有318个氨基酸、分子量为48KD的成熟蛋白。在氨基酸水平上，人Wnt-7a蛋白和小鼠的Wnt-7a蛋白具有98%的相似性。Wnt-7a通常在肺、睾丸、淋巴结和脑中表达，通过Wnt/β-catenin信号通路参与调控细胞的生命活动。

Wnt信号通路对多种正常组织和癌组织的细胞增殖和分化起着重要的调控作用。Wnt信号分子是癌症诊断、治疗和预防以及再生医学、组织工程的有效靶点。己公布的数据显示Wnt-7a在不同类型的恶性肿瘤中表现出不同的表达模式。在浆液性卵巢癌中，CTNNB 1未突变情况下，Wnt-7a通过CTNNB1(13-catenin)／TCF信号通路促进卵巢癌进展；在膀胱癌中，Wnt-7a的过表达促进了肿瘤的转移，并且高表达Wnt-7a蛋白的膀胱癌患者的总生存期较短；在乳腺癌中，Wnt-7a作为一种关键的肿瘤细胞分泌因子，通过诱导成纤维细胞活化而促进肿瘤细胞在体内转移，导致患者预后差。相反，在宫颈癌中，Wnt-7a可以抑制癌细胞的增殖和迁移。在小鼠中，Wnt-7a通过失活S期激酶相关蛋白(一种重要的细胞衰老的替代调节因子)诱导细胞衰老，从而抑制肺癌的发生；在白血病中，Wnt-7a也被鉴定为肿瘤抑制基因。因此Wnt-7a对于卵巢癌的预示具有重要的意义，而市场上现有的检测试剂盒，体系中多采用多克隆抗体，抗体特异性差，不能区分Wnt-7a高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对Wnt-7a检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。因此急需获得特异性识别Wnt-7a蛋白单克隆抗体，满足临床样本检测要求，提高检测的灵敏度和特异性。

现有的检测试剂盒体系中多采用多克隆抗体；抗体特异性差，不能区分Wnt-7a高度同源家族蛋白，由于其抗体本身效价或特异性的原因，也使得其对Wnt-7a检测的临床效用受到局限，降低了样本检测的特异性，同时也对灵敏度产生一定的影响。本发明通过双抗体夹心的原理，利用高亲和力高特异性配对单克隆抗体制备检测试剂盒，采用全自动化学发光仪检测样品浓度。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种分泌抗Wnt-7a单克隆抗体杂交瘤细胞株；本发明的目的之二在于提供分泌抗Wnt-7a单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体；本发明的目的之三在于提供含有所述单克隆抗体的试剂盒；本发明的目的之四在于提供所述单克隆抗体在制备检测Wnt-7a蛋白试剂中的应用。本发明技术方案的其中一方面，提供了分泌抗Wnt-7a单克隆抗体杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株为1B8A2和/或4G6F3，保藏于中国典型培养物保藏中心，（保藏中心地址为：中国.武汉.武汉大学，电话：027-68752319），1B8A2保藏编号为CCTCC NO:C202095, 4G6F3保藏编号为CCTCC NO:C202096。