[发明专利]一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法有效
| 申请号： | 202011014193.8 | 申请日： | 2020-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN111925977B | 公开（公告）日： | 2021-02-05 |
| 发明（设计）人： | 刘勇;王春香 | 申请（专利权）人： | 北京健为医学检验实验室有限公司;江苏康为世纪生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00 |
| 代理公司： | 北京惠智天成知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11681 | 代理人： | 王园园 |
| 地址： | 102206 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 去除 细胞 悬液中 死亡 方法 | ||
1.一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）配制明胶溶液，并滤膜过滤除菌；
（2）调整细胞悬液中细胞数量至106-107个/ml；
（3）将细胞悬液与明胶溶液混匀，并室温下静置，所述细胞悬液与明胶溶液混合溶液中明胶的终浓度为0.01g/ml-0.05g/ml；
（4）将细胞分离液和步骤（3）中制备的含明胶细胞悬液加入离心管中，室温下离心，所述细胞分离液选自Percoll细胞分离液、含聚蔗糖分离液、含泛影葡胺分离液中任意一种或其组合；
（5）弃去步骤（4）中离心管中的液体，将离心管管底的细胞沉淀重悬后，再次室温下离心；
（6）弃去步骤（5）中的液体，使用细胞培养液重悬细胞沉淀，即得去除死亡细胞后的活细胞悬液。
2.据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中细胞悬液与明胶溶液混合溶液中明胶的终浓度为0.02g/ml。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的静置为室温下静置8分钟以上。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的离心为350-450g室温离心15-30分钟；所述步骤（5）中的离心为750-850g室温离心3-7分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，使用PBS溶液调整细胞浓度；步骤（5）中，使用PBS溶液重悬细胞沉淀。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，将细胞悬液与明胶溶液1:1混匀。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）称取明胶溶于PBS溶液中，待明胶完全溶解后用0.22μm孔径的滤膜过滤除菌，明胶浓度为0.02g-0.1g/ml；
（2）用PBS溶液调整细胞悬液中细胞浓度为106-107个/ml；
（3）将细胞悬液与明胶溶液1:1混匀，并室温下静置8分钟以上；
（4）将细胞分离液和步骤（3）中制备的含明胶细胞悬液加入离心管中，两者的体积比为1:2-2:1，350-450g室温离心15-30分钟，所述细胞分离液选自Percoll细胞分离液、含聚蔗糖分离液、含泛影葡胺分离液中任意一种或其组合；
（5）弃去步骤（4）中离心管中的液体，将离心管管底的细胞沉淀用PBS溶液重悬后，750-850g室温离心3-7分钟；
（6）弃去步骤（5）中的液体，使用细胞培养液重悬细胞沉淀，即得去除死亡细胞后的活细胞悬液。
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