[发明专利]一种miR-17-92修饰的间充质干细胞、外泌体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种miRNA‑17‑92修饰的间充质干细胞、外泌体及其制备方法和应用，属于间充质干细胞基因改造的技术领域，所述间充质干细胞通过携带miR‑17‑92基因簇的慢病毒转染获得；所述的miRNA‑17‑92修饰的间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：1)分离并培养间充质干细胞；2)用携带miR‑17‑92基因簇的慢病毒转染步骤1)中所述的间充质干细胞获得miRNA‑17‑92修饰的间充质干细胞。本发明所述miRNA‑17‑92修饰的间充质干细胞外泌体能够显著提高人脐带间充质干细胞的存活率、提高人脐带间充质干细胞的迁移能力；能够应用于制备促进皮肤伤口愈合的药物。

技术领域

本发明属于间充质干细胞基因改造的技术领域，尤其涉及一种miRNA-17-92修饰的间充质干细胞、外泌体及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤经常因各种内在病理及外界机械因素而受损，这些急、慢性的皮肤缺损给患者及社会带来了沉重的负担。如何加速创面的愈合，促进创面的修复显得尤为重要。皮肤损伤是多种细胞死亡方式和炎性因子相互作用的综合结果，针对皮肤损伤的治疗应该是综合的再生策略。

在创面修复领域，间充质干细胞疗法取得了可喜的治疗效果。起初研究认为间充质干细胞发挥创面修复作用主要与其多向分化潜能有关，近来研究发现，MSC主要通过分泌细胞因子和外泌体(Exosomes)等发挥生物学功能。外泌体是细胞释放的，直径为50～100nm的微粒，含有磷脂、微小RNA等多种生物活性成分，是细胞间信息及遗传物质的传递载体。干细胞来源的外泌体仅具有干细胞本身的生物学特性，因此如果能够改变外泌体中的组成和丰度，可增强外泌体的效果，使干细胞外泌体更好的发挥促进血管新生、调节免疫、抑制纤维化、促进细胞增殖迁移与分化等作用；目前尚没有一种有效的改变外泌体中的组成和丰度方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种miRNA-17-92修饰的间充质干细胞、外泌体及其制备方法和应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种miRNA-17-92修饰的间充质干细胞，所述间充质干细胞通过携带miR-17-92基因簇的慢病毒转染获得。

优选的，所述miR-17-92基因簇包括miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92a。

优选的，所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

本发明提供了所述的miRNA-17-92修饰的间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)分离并培养间充质干细胞；

2)用携带miR-17-92基因簇的慢病毒转染步骤1)中所述的间充质干细胞获得miRNA-17-92修饰的间充质干细胞。

优选的，所述转染的MOI为8～12。

本发明提供了一种miRNA-17-92修饰的间充质干细胞外泌体，所述间充质干细胞外泌体表达miR-17-92基因簇。

本发明提供了所述的miRNA-17-92修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：

培养所述的miRNA-17-92修饰的间充质干细胞，收集培养液上清，将所述培养液上清进行第一离心，收集第一上清液，将所述第一上清液进行第二离心，收集第二上清液，将所述第二上清液与16％PEG 6000等体积混合、静置后，进行第三离心，收集第三沉淀，将所述第三沉淀与无菌PBS混合重悬获得间充质干细胞外泌体粗品；将所述间充质干细胞外泌体粗品与无菌PBS混合进行第四离心，收集第四沉淀，将所述第四沉淀与无菌PBS混合获得间充质干细胞外泌体；

所述第一离心的离心力为450～550g，所述第一离心的时间为4～6min；