[发明专利]一种石菖蒲直接器官发生型再生法

权利要求书

1.一种石菖蒲直接器官发生型再生法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将外植体消毒后接种至启动培养基上进行初代培养，得萌发芽；所述启动培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的成分：6-BA 1.5～2.0mg/L、NAA 0.3～0.5mg/L、蔗糖25～30g/L、琼脂4～6g/L和活性炭0.1～0.2g/L；所述外植体包括鞭芽或根状茎；

(2)将所述萌发芽接种至继代培养基上进行继代培养，萌发芽继续生长；所述继代培养基以MS为基本培养基，还包括以下质量浓度的成分：6-BA 2.0～2.5mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L、蔗糖25～30g/L、琼脂4～6g/L和活性炭0.1～0.2g/L；

(3)待步骤(2)所述继续生长的萌发芽叶长达到5～6cm时，移栽至装有蛭石的培养瓶中进行生根培养，所述生根培养时每天向培养瓶内加入5～7mg/L的IBA。

2.根据权利要求1所述再生法，其特征在于，步骤(1)所述消毒的方法，包括：将所述外植体用洗衣粉的水溶液浸泡10～20min，流水冲洗30～50min；用质量分数为75％的乙醇水溶液浸泡30～60s，无菌水冲洗2～3次后，再用质量分数为0.1％的HgCl₂水溶液中浸泡6～8min，无菌水冲洗3～5次后，吸干水分；每250mL所述HgCl₂水溶液中还包括0.5～1mL的吐温-80。

3.根据权利要求1所述再生法，其特征在于，步骤(1)所述初代培养时，先暗培养3～7d，然后进行光暗交替培养，光照时间16～18h/d，光照强度为10～12.5μmol/(m²·s)，温度为25℃。

4.根据权利要求1或3所述再生法，其特征在于，步骤(1)所述初代培养的时间为4周。

5.根据权利要求1所述再生法，其特征在于，步骤(2)所述继代培养时的光照强度为31.25～37.5μmol/(m²·s)，光照时间为16～18h/d，温度为24～27℃。

6.根据权利要求1或5所述再生法，其特征在于，步骤(2)所述继代培养的周期为4周。

7.根据权利要求1所述再生法，其特征在于，步骤(3)所述生根培养时，光照强度为25μmol/(m²·s)，光照时间为14h/d，温度为25℃。