[发明专利]一种用于测定毛竹笋组织细胞线粒体呼吸的试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202011015221.8 | 申请日： | 2020-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN112229949A | 公开（公告）日： | 2021-01-15 |
| 发明（设计）人： | 卢存福;王晓静;陈玉珍;耿新 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | G01N33/00 | 分类号： | G01N33/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 孙怡 |
| 地址： | 100083 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 测定 毛竹 组织细胞 线粒体 呼吸 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于测定毛竹笋组织细胞线粒体呼吸的试剂盒，包括呼吸缓冲液和呼吸抑制剂，其特征在于，所述呼吸抑制剂包括细胞色素呼吸抑制剂和抗氰呼吸抑制剂中的至少一种；
其中，所述呼吸缓冲液中含有4～6mM KH2PO4，8～15mM TES，8～15mM NaCl，2～5mMMgSO4，溶剂为水，PH值为7.2±0.2；
所述细胞色素呼吸抑制剂为包含NaN3、溶剂为蒸馏水的溶液；在将细胞色素呼吸抑制剂加入所述呼吸缓冲液后，NaN3的终浓度为40～60mM；
所述抗氰呼吸抑制剂为包含SHAM、溶剂为乙醇的溶液；在将抗氰呼吸抑制剂加入所述呼吸缓冲液后，SHAM的终浓度为4～6mM。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括打孔器，用于从毛竹笋样品中取得直径为2～3mm，厚度为150～700μm的测试样品。
3.一种毛竹笋组织细胞线粒体呼吸的测定方法，其特征在于，控制测试样品的直径为2～3mm，厚度为150～700μm；采用Seahorse XF96细胞代谢分析仪进行测试；
测试中所用的呼吸缓冲液中含有4～6mM KH2PO4，8～15mM TES，8～15mM NaCl，2～5mMMgSO4，溶剂为水，PH值为7.2±0.2；
测试中所用的呼吸抑制剂包括细胞色素呼吸抑制剂和抗氰呼吸抑制剂中的至少一种；
所述细胞色素呼吸抑制剂为包含NaN3、溶剂为蒸馏水的溶液；在将细胞色素呼吸抑制剂加入所述呼吸缓冲液后，NaN3的终浓度为40～60mM；
所述抗氰呼吸抑制剂为包含SHAM、溶剂为乙醇的溶液；在将抗氰呼吸抑制剂加入所述呼吸缓冲液后，SHAM的终浓度为4～6mM。
4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，进行呼吸测试时的程序设置为：混合3min，等待4min，测定5min，共11个循环。
5.根据权利要求3或4所述的测定方法，其特征在于，从同一个毛竹笋的不同部位获取多个测试样品。
6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括如下步骤：水化探针板、添加样品粘合剂、样品的制备与粘连、添加呼吸缓冲液和呼吸抑制剂、进行呼吸测试。
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