[发明专利]一种腺苷酸环化酶制备环磷酸腺苷的方法

权利要求书

1.一种腺苷酸环化酶制备环磷酸腺苷的方法，其特征在于，该方法包括：

以腺苷酸环化酶为催化剂，以三磷酸腺苷为底物，在Mg²⁺的存在下，获得含有环磷酸腺苷的反应液；

其中，所述腺苷酸环化酶具有如A1)、A2)、A3)、A4)、A5)或A6)所示的氨基酸序列：

A1)氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

A2)氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

A3)氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

A4)对A1)所限定的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸的缺失、插入或替换得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突变体；

A5)对A2)所限定的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸的缺失、插入或替换得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突变体；

A6)对A3)所限定的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸的缺失、插入或替换得到的具有95％以上的同源性的多肽片段或其突变体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，一种用于编码如权利要求1所述的腺苷酸环化酶的基因，具有如B1)、B2)、B3)、B4)、B5)或B6)所示的核苷酸序列：

B1)核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

B2)核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

B3)核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

B4)对B1)所限定的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的缺失、插入或替换得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列；

B5)对B2)所限定的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的缺失、插入或替换得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列；

B6)对B3)所限定的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸的缺失、插入或替换得到的具有90％以上的同源性的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸环化酶具有如A3)所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸环化酶在43-47℃的半衰期为90h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述腺苷酸环化酶由权利要求2所述的基因导入到宿主菌获得重组基因工程菌，通过诱导培养所述重组基因工程菌获得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述催化剂为含有腺苷酸环化酶的上清液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述底物的浓度为10-100g/L，Mg²⁺的浓度为0.12-12g/L，腺苷酸环化酶上清液用量以腺苷酸环化酶酶活计为100-700U/mL。