[发明专利]一种复合酶催化纤维素制备低聚龙胆糖的方法及其应用有效
| 申请号： | 202011015802.1 | 申请日： | 2020-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN112063605B | 公开（公告）日： | 2022-03-04 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;夏伟;许俊勇;徐星豪;黄燕 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12P19/14;C12P19/12;C12P19/00 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 复合 催化 纤维素 制备 龙胆 方法 及其 应用 | ||
1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶突变体为：将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甘氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甲硫氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第200位由酪氨酸突变为苯丙氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甘氨酸，同时将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第200位由酪氨酸突变为苯丙氨酸得到的。
2.编码权利要求1所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的表达载体。
4.携带权利要求2所述基因或权利要求3所述表达载体的微生物细胞。
5.一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，所述方法为将纤维素酶和权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体添加至含有纤维素和葡萄糖的反应体系中进行反应，得到反应液；从反应液中分离得到低聚龙胆糖。
6.如权利要求5所述的一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，所述纤维素酶为内切纤维素酶、β-葡聚糖酶、I型纤维二糖水解酶、II型纤维二糖水解酶的一种或多种。
7.如权利要求5或6所述的一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，向反应体系中添加的纤维素酶的浓度为10-50U/g纤维素滤纸酶活。
8.如权利要求5或6所述的一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，向反应体系中添加的β-葡萄糖苷酶突变体的浓度为100-400U/g葡萄糖。
9.如权利要求7所述的一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，所述反应体系中，底物纤维素的浓度为200g/L。
10.如权利要求7所述的一种多酶复配制备低聚龙胆糖的方法，其特征在于，所述反应体系中，底物葡萄糖的浓度为100g/L-400g/L。
11.权利要求1所述的突变体，或权利要求2所述的基因，或权利要求3所述的表达载体，或权利要求4所述的微生物细胞，或权利要求5-10任一所述的方法在制备低聚龙胆糖中的应用。
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