[发明专利]与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记及其应用

说明书

本发明涉及球虫耐药性检测技术领域，具体涉及与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记及其应用。本发明提供的SNP分子标记含有如SEQ ID NO.1所示序列第379位多态性为G/C的核苷酸序列。该SNP分子标记可用于区分鉴别癸氧喹酯敏感和耐药的鸡球虫，具有较高的癸氧喹酯耐药性检测准确性，检测结果与笼饲实验一致。本发明还提供SEQ ID NO.16‑17所示的该SNP分子标记的检测引物以及利用该引物结合PCR技术检测鸡球虫癸氧喹酯耐药性的方法。该方法具有检测耗时短、操作简单，检测成本低的优势，可广泛应用于鸡球虫癸氧喹酯耐药性的临床检测。

技术领域

本发明涉及球虫耐药性检测技术领域，具体涉及与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记及其应用，以及鸡球虫癸氧喹酯耐药性的检测方法。

背景技术

球虫为顶复门、艾美耳属的细胞内寄生虫，能够感染鸡的球虫有7种，包括堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、布氏艾美耳球虫(E.brunetti)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、早熟艾美耳球虫(E.praecox)和柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。它们在肠道的不同部位繁殖，破坏肠上皮细胞，引起消化吸收功能障碍，导致饲料转化率降低、鸡只生长迟缓等，严重时会造成雏鸡大规模死亡。

抗球虫药物自使用以来，有效降低了由球虫病造成的经济损失，在养鸡集约化和规模化发展过程中起到了十分重要的作用。但由于抗球虫药物的长期使用，导致针对不同抗球虫药物的耐药性球虫的出现，从而使得球虫耐药性成为鸡球虫病防控中不可忽视的重要问题。

癸氧喹酯(Decoquinate)作为一种喹啉衍生物，能够有效地阻止球虫子孢子入侵宿主细胞并且能够抑制第一代裂殖体发育，抗球虫效果显著。同时，该药物还具有低残留、代谢快等特点。然而，在该药物投入使用一段时间后，针对癸氧喹酯的耐药性球虫也不断地被发现。目前对癸氧喹酯耐药性的检测方法仍停留在笼饲实验，虽然这种方法的检测结果较为可靠，但实验耗时长，过程繁琐，影响因素较多，同时需要大量的实验动物和大量具有活力的卵囊。因此，急需开发一种能够快速检测癸氧喹酯耐药鸡球虫的方法，以便更好的指导球虫病用药，降低球虫感染对养殖业造成的经济损失。

发明内容

本发明的目的是提供一种与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记，本发明的另一目的是提供利用该SNP分子标记检测鸡球虫癸氧喹酯耐药性的方法。

本发明通过对癸氧喹酯耐药的鸡球虫和敏感的鸡球虫的基因组序列进行大量的比对分析，发现了位于细胞色素B基因第379位的SNP位点，该SNP位点为G对应于癸氧喹酯敏感，该SNP位点为C对应于癸氧喹酯耐药。经大量的鸡球虫不同临床耐药虫株的验证，该SNP位点可用于区分鉴别癸氧喹酯耐药的鸡球虫和敏感的鸡球虫，其鉴定结果与笼饲实验的鉴定结果一致。

具体地，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记，其含有如SEQ ID NO.1所示序列第379位多态性为G/C的核苷酸序列。

以上所述的与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记可为如SEQ ID NO.1所示的DNA片段，SNP位点位于该DNA片段的第379位，多态性为G/C。

以上所述的与鸡球虫癸氧喹酯耐药性相关的SNP分子标记也可为由SEQ ID NO.2-3或SEQ ID NO.16-17所示引物扩增得到的DNA片段，SNP位点的位置对应于如SEQ ID NO.1所示的DNA片段的第379位，多态性为G/C。

具体地，所述SNP分子标记的多态性位点为G，对应于癸氧喹酯敏感，多态性位点为C，对应于癸氧喹酯耐药。

第二方面，本发明提供用于扩增所述SNP分子标记的引物对，其核苷酸序列如SEQID NO.2-3所示或如SEQ ID NO.16-17所示。