[发明专利]一种PD-L1免疫组织化学参考品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种PD-L1免疫组织化学参考品，其特征在于，由以下成份组成：

（1）PD-L1无染色对照细胞点、PD-L1弱染色对照细胞点、PD-L1中等染色对照细胞点、PD-L1强染色对照细胞点；

（2）PD-L1待测样品放置区；

所述PD-L1无染色对照细胞点设置有PD-L1免疫组织化学染色强度为0的单克隆细胞系切片；

所述PD-L1弱染色对照细胞点设置有PD-L1免疫组织化学染色强度为1+的单克隆细胞系切片；

所述PD-L1中等染色对照细胞点设置有PD-L1免疫组织化学染色强度为2+的单克隆细胞系切片；

所述PD-L1强染色对照细胞点设置有PD-L1免疫组织化学染色强度为3+的单克隆细胞系切片；

所述染色为免疫组织化学染色，所述PD-L1待测样品放置区用于放置待检测的组织或细胞切片；所述单克隆细胞系中含有稳定转化的外源PD-L1基因，所述外源PD-L1基因通过同源重组的方式整合到细胞基因组中，所述同源重组的方式采用CRISPR/Cas9系统；所述PD-L1免疫组织化学染色强度为0的单克隆细胞系、所述PD-L1免疫组织化学染色强度为1+的单克隆细胞系、所述PD-L1免疫组织化学染色强度为2+的单克隆细胞系、所述PD-L1免疫组织化学染色强度为3+的单克隆细胞系是来自同一株母细胞的PD-L1表达量不同的细胞。

2.根据权利要求1所述的参考品，其特征在于，所述单克隆细胞系切片为石蜡包埋的切片。

3.一种具有权利要求1-2任一项所述的参考品的PD-L1免疫组织化学诊断载玻片，其特征在于，所述载玻片上排列有所述（1）PD-L1无染色对照细胞点、PD-L1弱染色对照细胞点、PD-L1中等染色对照细胞点、PD-L1强染色对照细胞点；

和

（2）PD-L1待测样品放置区。

4.一种如权利要求1所述的PD-L1免疫组织化学参考品的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）通过同源重组的方式将PD-L1的cDNA序列敲入同一种细胞系，获得单克隆细胞系；所述同源重组的方式采用CRISPR/Cas9系统；

（2）通过qRT-PCR和免疫组织化学染色，确定所述单克隆细胞系的PD-L1表达强度；

（3）将PD-L1免疫组织化学无染色、弱染色、中等染色、强染色的单克隆细胞系切片排列在一张载玻片上，留出放置待测样本的区域，作为PD-L1免疫组织化学染色的参考品。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中所述的免疫组织化学染色需要将所述单克隆细胞系包埋成蜡块后切片。