[发明专利]一种当归酒中44种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法

权利要求书

1.一种当归酒中44种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法，其特征在于：

首先将当归酒待测酒样冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜，经UPC2 BEH柱进行梯度洗脱分离，同时采集UPC2-PDA模式及MS模式数据，ESI正负离子模式下分别监测，将获得的待测样品谱图与标准谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，通过MS模式标准曲线线性回归方程对各有效成分进行定量；

包括如下步骤：

步骤1：前处理

将当归酒待测酒样经冷冻干燥成固体，以甲酸-水-甲醇混合溶液溶解后过0.22μm滤膜；

步骤2：标准品的配制

分别配制1g/L的木焦油酸、β-谷甾醇、胡罗卜苷、棕榈酸、欧当归内酯 A、新当归内酯、肉豆蔻酸、环十五内酯、花侧柏烯、雪松烯、α-蒎烯、欧前胡素、阿魏酸、邻苯二甲酸二丁酯、别罗勒烯、月桂烯、正丁基苯酞、当归酮、蒿本内酯、香芹酚、佛手柑内酯、白芷素、当归醇A、香草酸、当归醇B、当归醇 K、川芎内酯、当归酸异丁酯、Z-丁烯基苯酞、琥珀酸、水合氧化前胡素、白芷酸酐、二氢山芹醇、7-羟基香豆素、愈创木酚、苯酚、香草醛、当归酸甲酯、邻苯二甲酸、当归碱、白芷酸、当归内酯、烟酸、肌苷的标准溶液，溶剂为甲酸-水-甲醇溶液，将44种当归有效成分的标准溶液混合并逐级稀释，获得不同浓度的混合标准品溶液；

步骤3：标准谱图与标准曲线的绘制

将步骤2配制的混合标准品溶液进行色谱洗脱分离，利用PDA和MS模式进行采集，获得44种当归有效成分标准品的标准谱图，以每种有效成分的峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，获得相应的标准曲线以及线性回归方程；

步骤4：待测样品的检测

将经步骤1前处理后的待测酒样首先进行色谱洗脱分离，然后利用PDA和MS模式进行数据采集，将获得的待测样品谱图与步骤3获得的标准谱图对比，利用保留时间和分子量进行定性，通过标准曲线线性回归方程进行定量；

所述甲酸-水-甲醇混合溶液中，甲酸的浓度为0.4%，甲醇的浓度为94.6%，余量为水，V/V；

色谱洗脱分离的条件设置如下：

色谱柱：ACQUITY UPC2，BEH，2.1×50 mm，1.7μm；

进样量：2μL；

柱温：55℃流动相：流动相A CO₂，流动相B为含0.4%甲酸、2%水的甲醇溶液，流速：1.5mL/min；梯度洗脱程序为：初始条件为2%的流动相B，流动相B在2 min内增加至50%，达到50%后保持1.5min，然后0.1min内流动相B返回到2%，重新平衡系统3.0 min；整个循环时间为10.0 min。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于检测条件设置如下：

PDA检测器波长：228nm、320nm、280nm；

MS模式；

ESI+电离模式条件：毛细管电压：3.0kV；取样锥孔电压：21 V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]⁺= 556.2766；

ESI-电离模式条件：毛细管电压：2.5kV；取样锥孔电压：21V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：450℃；脱溶剂气体流速：1000L/H；参比质量：亮氨酸脑啡呔[M-H]^- = 554.2615；采集范围：m/z 50~1200。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：

步骤4中，为了确保定性的准确性，可通过TIC窗口提取PDA检测数据，利用PDA检测的保留时间、ESI检测的保留时间及分子量三个参考值，对比标准品和样品，以此确保定性的准确性。