[发明专利]一种基于LC-MS测定辅酶Q10

说明书

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于LC‑MS/MS测定辅酶Q10胶囊中茄尼基氯的方法。该方法包括如下步骤：S1茄尼基氯对照品溶液配制步骤；S2茄尼基氯系列标准品溶液配制步骤；S3测定计算样品中茄尼基氯含量步骤。本发明可以定量测定辅酶Q10胶囊中的茄尼基氯的含量，从而有效的控制辅酶Q10胶囊的质量。根据本发明提供的方法可以使辅酶Q10胶囊与茄尼基氯有效分离，具有精密度好，分离度好，如果样品中含有茄尼基氯可以准确检出。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于LC-MS/MS测定辅酶Q10胶囊中茄尼基氯的方法。

背景技术

辅酶Q10(coenzyme Q10，结构如下式1)又称泛醌，在呼吸链中是一种与蛋白质结合不紧密的辅酶，是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，在人体呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用。

辅酶Q10作为细胞代谢和细胞呼吸激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂，能抑制线粒体的过氧化，具有促进氧化磷酸化反应，保护生物膜结构完整性的作用。此外，辅酶Q10对免疫非特异性具有增强的作用，可以增强抗体产生的能力，改善T细胞功能。辅酶Q10实质上是一种代谢激活剂，能激活细胞呼吸，加速产生三磷酸腺苷(ATP)，并起到解毒急救的作用；它还可改变细胞和组织的缺氧状态，对肝、脑、心脏及神经系统均有较好的保护和改善作用，增强体内的非特异性免疫应答。经证实，其可以辅助治疗心血管疾病(如：病毒性心肌炎、慢性心功能不全)、肝炎(如：病毒性肝炎、亚急性肝坏死、慢性活动性肝炎)、癌症的综合治疗(能减轻放疗、化疗等引起的某些不良反应)。

茄尼基氯，分子式为C₄₅H₇₃Cl，分子量为650，结构如下式2，是辅酶Q10在生产过程的中间体，其中的烯丙基氯团可能会与DNA发生加成反应，有一定潜在的基因毒性。

辅酶Q10胶囊在中国药典中只规定了辅酶Q9杂质，在美国药典中未考察有关物质茄尼基氯；经查阅文献可知，目前茄尼基氯在辅酶Q10原料的中国药典、美国药典和欧洲药典等标准中也均未有其测定方法，在其他期刊文献中也没有记载。

在对辅酶Q10胶囊仿制药研发的过程中，需要对辅酶Q10胶囊的基因毒性杂质茄尼基氯进行研究，试验过程中发现茄尼基氯分子量大，在紫外条件下吸收很弱，而且辅酶Q10胶囊中基因毒性杂质的限度均较低，无法直接采用HPLC方法对辅酶Q10胶囊中的茄尼基氯进行测定。

发明内容

本发明为克服现有技术的上述不足，通过对辅酶Q10胶囊中茄尼基氯测定方法进行研究，提供了一种基于LC-MS测定辅酶Q10胶囊中茄尼基氯的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：

一种基于LC-MS测定辅酶Q10胶囊中茄尼基氯的方法，其包括如下步骤：

S1茄尼基氯对照品溶液配制步骤；

S2茄尼基氯系列标准品溶液配制步骤：配置至少3个浓度的茄尼基氯标准工作液，对标准工作液进行HPLC-MS测定，以标准工作液的茄尼基氯色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；

S3测定计算样品中茄尼基氯含量步骤：

将辅酶Q10胶囊内容物配制成供试品溶液通过LC-MS法进行检测，测得样品液中茄尼基氯的色谱峰面积，代入步骤S2所得标准曲线，计算得到样品液中茄尼基氯浓度及含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中茄尼基氯含量。

优选地，高效液相色谱检测的条件为：

色谱柱为C18色谱柱；

流动相为乙腈-甲酸溶液。