[发明专利]一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质含量的测定方法，特点是包括以下步骤(1)溶液制备：取待测苯磺酸氨氯地平药品用乙腈水溶液稀释成浓度为1mg/mL的供试品溶液，同时配制对照品；(2)色谱条件：流动相A为0.08％‑0.12％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱：0～5min，乙腈体积比从45～55％线性升至90％；5～7min，乙腈体积比保持90％；7～7.1min，乙腈体积比从90％线性降至50％；7.1～12min，乙腈体积比保持50％；质谱采用碰撞诱导解离裂解方式，优点是选择性强、准确度好、精密度和灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种苯磺酸氨氯地平的杂质检测方法，尤其是涉及一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质-乙基-4-(2-邻苯二甲酰亚胺基乙氧基)乙酰乙酸乙酯含量的测定方法。

背景技术

高血压是一个全球性健康问题，影响约11.3亿人，间接导致每年约有750万人死亡，它是导致心脏病和中风的主要因素。目前，全球约14亿高血压患者中只有36％接受治疗，只有14％接受治疗的患者能够控制收缩压低于140mmHg。如果患者的血压不能被控制，与之相关联的中风和冠状动脉病的患病风险也将随之增加。

目前用于治疗高血压的药物主要以钙拮抗剂为主，其中苯磺酸氨氯地平作为新一代二氢吡啶类钙通道阻滞剂，是治疗高血压的首选药物之一，能够稳定心绞痛，它能够有效抑制钙离子跨膜进入血管平滑肌和心肌细胞，使外周动脉血管产生扩张作用，进而导致心肌细胞的收缩力随之降低，主要是冠状和系统性动脉扩张，血流量增加以及氧气输送量也增加，外周助力降低，因此血压降低。与其他钙通道阻滞剂相比，氨氯地平被证明具有高的生物利用度、较大的分布容量以及半衰期持续时间更长。苯磺酸氨氯地平化学名称：(±)-2-[(2-氨基乙氧基)甲基]-4-(2-氯苯基)-1，4-二氢-6-甲基-3，5-吡啶二羧酸-5-甲酯，3-乙酯苯磺酸盐。

当今，人们越来越重视药物的安全性，药物一致性评价当中，对杂质含量的控制是药物有效性的关键因素，药品中杂质的存在可能会降低药物的疗效，甚至引起毒副作用。近年来，药物成分和药品中潜在的基因毒性杂质问题备受关注，制药行业和监管机构已经认识到基因毒性杂质对人类健康和监管问题的重要性。药品研制过程应尽量避免基因毒性杂质，但完全去除很困难，在这种情况下，基因毒性杂质的含量应控制在对临床试验对象或患者不存在显著风险的范围内。根据ICH M7对药物DNA反应诱变性的杂质以及潜在致癌性杂质限度控制要求，通过建立毒理学关注阈值(TTC)，认为1.5μg/人/天是被可接受的风险范围，然后通过适当的检测分析方法控制药物中基因毒性杂质的种类和含量，确保药品质量。

通过分析，苯磺酸氨氯地平原料药生产工艺过程中可能会有基因毒性杂质生成。对照致突变警示结构和中国新药杂志上发表的《遗传毒性杂质的警示结构》，我们对可能的潜在基因毒性杂质进行了评估分析，应用TOXTREE和VEGA软件对可能具有致突变警示结构的反应物料和中间体进行计算机模拟的毒性评估。结果显示，乙基-4-(2-邻苯二甲酰亚胺基乙氧基)乙酰乙酸乙酯中间体呈Ames阳性，为可能的潜在致突变基因毒性杂质。乙基-4-(2-邻苯二甲酰亚胺基乙氧基)乙酰乙酸乙酯中间体结构为：

欧洲药品管理局(EMA)、美国食品药品管理局(FDA)及人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)先后颁了基因毒性杂质控制的指导文件，推荐按毒理学关注阈值(TTC，1.5μg/天)来控制用药风险。基于TTC，根据苯磺酸氨氯地平每日最大服用剂量为10mg可知：潜在基因毒性杂质乙基-4-(2-邻苯二甲酰亚胺基乙氧基)乙酰乙酸乙酯(本品为高血压长期治疗用药物，服药周期长，按照服药期间超过10年计算)：可接受限度(ppm)＝(1.5μg/d)/(0.01g/d)＝150ppm。针对不同限度的基因毒性杂质，需要不同的检测手段，即开发不同的检测方法，常用的检测方法为高效液相色谱法或高效液相质谱联用法。目前，国内外还没有公开任何针对该基因毒性杂质的检测和控制方法的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种选择性强、准确度好、精密度和灵敏度高的苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质含量的测定方法。