[发明专利]一种判断葡萄糖淀粉酶的活力检测是否准确的方法

说明书

本发明公开了一种判断葡萄糖淀粉酶的酶活力检测是否准确的方法，将国标法与葡萄糖试剂盒法相结合，将两种方法测得酶活力的相除，得到比值，该比值为一个定值；在生产与应用葡萄糖淀粉酶的过程中，两种测定方法联用，得到酶活力比值。在工业生产中测定葡萄糖淀粉酶活力时，可以依据比值判断每一次酶活力检测的准确性；从而满足准确检测葡萄糖淀粉酶酶活力的要求，克服了传统测定葡萄糖淀粉酶活性方法中存在的误差过大问题。

技术领域

本发明公开了一种判断葡萄糖淀粉酶的活力检测是否准确的方法，利用国标法和葡萄糖试剂盒法联用测定葡萄糖淀粉酶活力，属于生物化学分析领域。

背景技术

葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase EC3.2.1.3)又称糖化酶。主要存在于黑曲霉、米曲霉、根 霉等丝状真菌和酵母中，同时也存在于人的唾液、动物胰腺及细菌中。已报道的产葡萄糖淀粉酶真菌微生物有 23个属35个种，细菌有3属3种，用于工业生产的菌株主要是黑曲霉。葡萄糖淀粉酶是一种外切型糖苷酶，从淀粉的非还原性末端依次水解α-1，4糖苷键，主要生成葡萄糖。葡萄糖淀粉酶被广泛地应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸、甘油、淀粉糖等工业生产中，它是我国产量最大的酶制剂产品之一。

目前，在生产过程中，一般使用中国国家标准法GB1886.174-2016（以下简称：国标法）进行酶活力检测，但国标法采用滴定法测酶活力，该方法操作繁琐，滴定时需要用肉眼观察颜色的变化，误差较大。不同的人测同一个葡萄糖淀粉酶，会得到不同的酶活力结果。因而，无从判断结果的准确性。葡萄糖试剂盒法测葡萄糖淀粉酶的活力相对准确，但也有不小的误差。葡萄糖淀粉酶的成本占工业生产成本的很大部分。酶活力检测不准确，会导致生产成本的大幅上升。

用国标法测定时，检测指标包括麦芽糖，麦芽二糖等还原糖。而用葡萄糖试剂盒法测葡萄糖淀粉酶的活力时，检测指标是葡萄糖。对于同一个葡萄糖淀粉酶，利用国标法测出的葡萄糖淀粉酶活力与葡萄糖试剂盒法测出的活力比值是一个定值，根据该比值可以判断葡萄糖淀粉酶活力检测的准确性。

在葡萄糖淀粉酶的生产和应用过程中需要经常检测葡萄糖淀粉酶活力，本发明的目的在于建立国标法和葡萄糖试剂盒联用，得到两种方法测得的葡萄糖淀粉酶酶活力的比值，用该比值判定酶活检测的准确性，以指导葡萄糖淀粉酶的生产和应用。

发明内容

本发明公开了一种判断葡萄糖淀粉酶的酶活力检测是否准确的方法，克服了传统葡萄糖淀粉酶测定方法误差过大的问题，为检测葡萄糖淀粉酶活力的准确性提供了依据。

本发明所述的一种判断葡萄糖淀粉酶的活力检测是否准确的方法，是通过以下技术方案实现的：

1）利用国标法测定葡萄糖淀粉酶的酶活力

①取2个锥形瓶，其中一个为样品瓶，另一个为空白对照瓶，向每个瓶中分别加入25mL质量浓度为20g/L的淀粉溶液和5mL pH为4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液，摇匀40℃水浴预热5～10min；

②向样品瓶中分别加入2mL待测葡萄糖淀粉酶，摇匀，40℃水浴反应30min；

③分别往每个瓶中添加0.2mL质量浓度为200g/L的NaOH溶液，摇匀，迅速用水冷却，终止酶反应；往空白对照瓶中加入2mL待测葡萄糖淀粉酶；

④从步骤③中的样品瓶和空白对照瓶中分别吸取出的反应液5mL到碘量瓶中，加入5mL浓度为0.1M碘标液，在加入15mL浓度为0.1M的NaOH溶液，将碘量瓶放入黑暗中反应15min，取出碘量瓶，加入2mL浓度为2M的H₂SO₄，用0.05M的硫代硫酸钠进行滴定；

根据下列公式（1）计算待测葡萄糖淀粉酶样品的酶活力X₁，单位为U/mL或U/g：

式中：