[发明专利]一种猪圆环病毒2型阳性血清及其制备方法

说明书

本发明涉及一种猪圆环病毒2型阳性血清及其制备。所述血清主要用于兽用生物制品的质量控制，该血清的制备包括猪圆环病毒2型免疫原的制备、阴性试验动物的筛选、免疫及抗体水平监测及阳性血清检定。采用本发明所述工艺制备的猪圆环病毒2型阳性血清中和效价高，能解决目前兽用生物制品检验中猪圆环病毒2型毒种中和困难的难题；本发明制备的猪圆环病毒2型阳性血清纯净性好，无菌、无支原体、无外源病毒污染；特异性好，不含有除猪圆环病毒2型抗体外的其他猪病常见病原抗体。以上特征充分满足了检验用阳性血清的要求，对于提升我国猪圆环病毒2型疫苗质量具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种猪圆环病毒2型阳性血清及其制备方法，属于生物技术和动物病毒学领域。

背景技术

猪圆环病毒病(PCVD)的含义是指一系列综合症侯群或是与PCV2(porcinecircovirus 2type)感染相关的疾病。现已证实，PCV2主要侵害猪体的免疫系统，导致免疫抑制及机体抵抗力降低，干扰和破坏猪对其他疫病免疫抗体的产生和维持，从而继发其他疾病。因此，在养殖业中，PCV2的危害往往不是孤立的，常引起其它重要疾病(如猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征、猪副嗜血杆菌病、猪肺炎支原体病、猪链球菌病、多杀性巴氏杆菌病等)的继发感染。猪圆环病毒病发病率可达50％，死亡率可能因猪场条件、继发感染情况而不同，一般在5％～70％。猪圆环病毒病中，以断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post weaningmultisystemic wasting syndrome，PMWS)对养猪业造成的危害最为严重。

目前我国猪圆环病以预防为主，主要以全病毒灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗为主。全病毒灭活疫苗采用PK15细胞培养，其生产的过程涉及多种生物性原材料，如血清、胰酶、细胞等，极易受到外源因子的污染。而所污染的外源因子的不确定性给检验带来极大的困难。尤其是种毒，按照现行《中国兽药典》的规定，需进行外源病毒检验，检验时应采用特异性血清对疫苗毒进行中和。抗血清的制备技术虽比较成熟，但因病原特点不同及用途不同，制备的关键点有所差异。目前，国家知识产权局专利查询已公布的动物性抗血清约30余项，但尚未有猪圆环病毒阳性血清制备方法的报道和专利。在兽用生物制品外源病毒检验过程中，低效价的猪圆环病毒2型阳性血清不能完全中和疫苗毒及种毒，且生产企业自行制备的血清存在特异性差、效价低、对细胞毒性大、外源因子污染等问题，严重影响了产品质量检验。

本发明提供了一种针对猪圆环病毒2型高效价、成分单一、纯净良好的特异性阳性血清的制备工艺，该工艺制备的阳性血清充分满足了外源病毒检验对检验试剂的要求，解决猪圆环病毒疫苗质量控制检验试剂短缺问题，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

发明内容

本发明为解决兽用生物制品标准物质短缺问题，提供了一种猪圆环病毒2型阳性血清制备工艺。采用该工艺制备的阳性血清中和效价高，能解决目前猪圆环病毒2型毒种外源病毒检验中和用标准物质问题；该工艺制备的阳性血清纯净性好，不含有其他猪常见病原；特异性好，不含有除猪圆环病毒2型抗体外的其他猪常见病原抗体。以上特征充分满足了兽用生物制品检验对阳性血清的要求，解决了猪圆环病毒2型疫苗质量控制的标准试剂短缺问题，对于兽用生物制品行业的健康发展具有重要意义。

为实现上述目标，本发明实施了以下技术方案：

1.一种猪圆环病毒2型阳性血清，其特征在于该阳性血清是采用剖腹产、隔离饲养、人工饲喂的方式，排除了母源抗体的干扰的CDCD猪(剖腹产且不吃母乳的猪，下同)经高浓缩抗原多次免疫获得的，其血清的中和抗体效价≥1:64；

2.本发明所述一种猪圆环病毒2型阳性血清，其特征在于该血清的制备方法是：

(1)种毒制备猪圆环病毒2型毒种采用经敏感、纯净的PK15细胞进行微载体悬浮培养，收获病毒液，并经超滤浓缩50～100倍以上去除小分子杂蛋白，收集病毒液，再经无菌检验、支原体检验和外源病毒检验合格，病毒含量不低于10^8.0TCID₅₀/mL；