[发明专利]一种通过评估外周血免疫情况分析乙肝肝硬化情况的方法

说明书

本发明涉及一种利用乙肝肝硬化患者和正常人外周血内γδT细胞的数量和表型分布差异评估外周血的免疫情况并利用此数据提供乙肝肝硬化发病情况信息的方法，其特征包括：(A)在外周血免疫细胞中分析γδT细胞占淋巴细胞(lymphocytes)比例和该细胞绝对数量的阶段；(B)检测外周血γδT细胞激活程度，杀伤能力等，并分析乙肝肝硬化患者和正常人的外周血内免疫细胞分布情况的阶段；(C)在乙肝肝硬化和正常人当中，为判定肝硬化发病情况，而在患者及正常人两个组群中辨别其有意义的标记结果值显示出统计学上的显著性和差异的组合的阶段；以及(D)分析乙肝肝硬化患者外周γδT细胞比例与疾病进展阶段相关性。

技术领域

本发明涉及一种方法，通过测量和诊断乙肝肝硬化患者和正常人的外周血内γδT细胞的数量和表型分布差异，找出两个群组之间显示出明显差距的标记，分析乙肝肝硬化患者外周血γδT细胞比例和乙型肝炎肝硬化发病进程的相关性，并提供利用外周血鉴定乙型肝炎肝硬化发病进程的相关标准。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)感染是多种肝病的主要危险因素，乙型肝炎肝硬化是乙型肝炎肝硬化发展的结果。肝硬化必须依靠病理诊断、超声、腹腔镜检和CT等检查，但是这些检测手段在疾病发生早期的诊断中作用有限。近年来，随着免疫治疗的的快速发展，免疫诊断作为一种新兴的诊断技术，也成为帮助临床查找病因、了解病情进展的重要方法。

越来越多的证据表明，乙型肝炎肝硬化患者的肝脏中发生免疫失调。这些变化包括肝脏中炎性环境的恶化，表现为浸润的非病毒特异性白细胞以及偏斜的细胞因子和趋化因子谱。炎性白细胞浸润肝脏在确定HBV发病和发展中起重要作用。肝脏是具有大量固有免疫细胞的器官，包括天然杀伤(NK)细胞，天然杀伤T(NKT)和γδT细胞。γδT细胞是一种重要的免疫细胞类型，根据T细胞受体链的表达可分为Vδ1和Vδ2γδT细胞两种亚型。γδT细胞亚群可直接识别在肿瘤细胞或病原体感染细胞表面表达的分子，而不是由专业抗原呈递细胞加工的肽。通常，γδT细胞已被赋予针对造血和实体瘤以及微生物感染的保护作用。有关人类病毒感染中γδT细胞的可用数据最初是从病毒感染研究中获得的，认为γδT细胞反应可实现初始控制和控制，有效发展适应性免疫反应。

除肝脏内部，血样里也包括几乎大部分的免疫细胞群及其亚型免疫细胞，研究外周血γδT细胞免疫活化和迁移状态对揭示CHB发病机制和进程具有重要意义。CD38是一种表达在早期T细胞表面的糖蛋白，成熟以后消失，但是T细胞活化后又重新出现；静止的T淋巴细胞一般不表达CD69，在受到某些刺激后T淋巴细胞表面就合成和表达一些新的糖蛋白，其中最早表达的是CD69。CD38和CD69作为T细胞免疫活化的标志，在许多急性或慢性感染中均会表达升高，如人类免疫缺陷病毒(HIV)、EB病毒(EBV)等感染。同时，淋巴细胞(包括T细胞)的迁移不仅取决于各种粘附分子的联合作用，还受趋化因子与其受体之间相互作用的控制。细胞表面的趋化因子受体CCRs、CXCRs与相应配体结合后能够促进细胞的迁移、浸润。循环中的T细胞响应趋化因子的活化而迁移，这些趋化因子在激活正常T细胞表达和分泌，如CXCR 3和CXCR4。

因此本发明针对外周血免疫细胞中γδT细胞的数量和表型分布差异，其中包括在外周血免疫细胞中分析γδT细胞占淋巴细胞比例和该细胞绝对数量，外周血γδT细胞激活程度，迁移能力，与正常人的外周血中γδT细胞数量和表型分布做对比，将显示出统计学上的显著性和差异的组合进行标记，分析出乙肝肝硬化患者外周γδT细胞与乙肝肝硬化疾病进程的相关性，建立利用外周血鉴定乙型肝炎肝硬化发病进程的相关标准。

发明内容

本发明的目的在于，为诊断乙肝肝硬化的发病情况，在外周血的γδT细胞当中找出乙肝肝硬化患者较正常人具有差异的标记。从而诊断个体免疫活性，提供相应的免疫治疗方法。