[发明专利]一种核酸质谱离子净化方法

权利要求书

1.一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，通过净化树脂及净化容器将核酸扩增产物中的阳离子净化，所述净化步骤如下：

S1：树脂转型，将其他类型的阳离子树脂转型为铵型树脂；

S3：离子净化，将净化树脂添加到核酸样本中进行金属阳离子净化，形成净化液；

S4：净化检测，将净化液上清进行核酸质谱检测，通过加合物分子量确认净化效果。

2.根据权利要求1所述的一种核酸离子净化方法，其特征在于，所述净化步骤还包括介于步骤S1和S3之间的S2步骤：增加荧光，将转型树脂中添加荧光素形成净化树脂。

3.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述净化树脂选用含有R-SO3-官能团的苯乙烯-二乙烯苯共聚物的阳离子交联树脂进行转型成铵型树脂，优选低交联树脂，交联量为2％～20％，直径为20～1000μm圆形或近似圆形强酸性阳离子树脂。

4.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述铵型树脂转型完成后pH值8-9，优选pH值为9。

5.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述S1树脂转型由其他类型阳离子树脂经过以下步骤预加工制作成H+型树脂或直接选用H+型树脂转型为NH4⁺型树脂：

S11：H⁺型树脂制备，取阳离子交联树脂及及该树脂相对选择性2-5倍的1M的HCL将树脂进行混合/和层虑或者洗涤将离子型转化为H⁺离子型树脂或/和取含有H⁺离子型的生物级阳离子交联树脂进行反复层虑或和洗涤至中性；

S12：NH4⁺型树脂制备，上述H⁺离子型树脂用体积2～5倍的的3mol/L的氨水浸泡24-48小时或用2-5倍1M的NH4CL浸泡24-48小时，用纯化水洗至中性,即得NH4⁺离子型树脂。

6.根据权利要求2所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于：所述S2步骤树脂转型的树脂优选添加1pg～1mg/ml荧光素作为荧光指示剂，荧光素依据检测波长不同优选但不限于DAPI、FITC、TRITC、PE一种或多种荧光素，形成净化树脂。

7.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述净化树脂独立封装到净化容器，净化容器为密封包装，每个独立密封包装的转化树脂优选适用于一份或多份样本，多个独立密封包装的转化树脂可组成阵列适用于多份或连续份样本。

8.根据权利要求7所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述净化容器一般为2μL、5μL、10μL、20μL、50μL、100μL、200μL、500μL、1000μL、1500μL、2000μL的无DNA、无RNA的生物样本容器，生物样本容器优选塑料或和玻璃独立容器或和容器阵列试管、离心管或微孔板。

9.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述S3离子净化方法由以下步骤：

S31：纯水预混，在独立组分包装的转型树脂中加入1-100倍的纯净水，采用包含但不限于吸打、搅拌、震荡等设备将纯净水与离子净化材料充分混合，产生预混液；

S32：离子抚育，将去预混液在室温至60℃度环境下静止抚育1s-60min，产生含NH4⁺去离子液；

S33：样本混合，将去离子液移入样本，用包含但不限于吸打、搅拌、震荡等设备将去离子液与样本充分混合，产生混合液；

S34：离子净化，将样本混合液静止在室温至60℃环境下静止1s-60min，使混合液进行离子交换，金属阳离子与树脂R-SO3-结合并沉淀到样本容器底部，上清即为净化过的样本溶液。

10.根据权利要求1所述的一种核酸质谱离子净化方法，其特征在于，所述S4净化检测方法由以下步骤：

S41：样本点样，取混合液中上清(净化液)，将上清加入质谱检测耗材进行结晶；

S42：样本监测，通过耗材上净化液中的荧光染料的荧光信号，监测净化液加载到耗材结晶上分布，确认净化后样本加样量及样本在耗材中的分布和形态；

S43：质谱检测，将承载净化液的核酸质谱耗材，放入核酸质谱检测设备进行检测得到质谱图及质谱数据；

S44：读取质谱图或质谱数据，观察金属阳离子与核酸序列的加合物分子量，确认净化效果。