[发明专利]多肽的制备方法

说明书

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及多肽的制备方法。本发明提供的多肽的制备方法包括以下步骤：选择rink amide resin作为起始树脂；按照Fmoc固相多肽合成策略，依次偶联多个Fmoc‑Lys(Boc)‑OH及对氨基苯甲酸；再按照棕榈酰四肽‑7的肽链顺序合成完毕；用TFA将肽链从树脂上裂解下来,反向制备纯化，得到高纯度含有可溶性肽片段的棕榈酰四肽‑7；将肽片段溶解于水中，加入碱将水溶性片段脱除，从而得到高纯度的棕榈酰四肽‑7。本发明的突出优势在于将原来由于难溶解而不易纯化的肽片段通过连接临时性水溶性片段而整体提高肽链的水溶性，从而使纯化制备更高效简便，也使高纯度棕榈酰四肽‑7制备成为可能。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及多肽的制备方法。

背景技术

棕榈酰四肽-7(PalmitoylTetrapeptide-7)又称为棕榈酰四肽-3，是一种由四个氨基酸构成的合成胜肽，其氨基酸序列为Pal-Gly-Gln-Pro-Arg，缩写为Pal-GQPR，属于信号类胜肽中棕榈酰寡肽系列多肽中的一种。其用于美容产品和化妆品中抑制过量细胞白介素(interleukins)的生成。这种化学信使会触发身体的急性炎症反应，导致糖基化损伤，即导致葡萄糖和蛋白质交联和结合过程损伤，使组织硬化。对皮肤的支撑系统，如胶原蛋白、弹性蛋白和其他蛋白质造成负面影响，从而形成皱纹、松弛和肤色不均匀。

Pal-Gly-Gln-Pro-Arg-OH 式I

目前，棕榈酰四肽-7主要采用的固相合成方法进行制备。李乾，张忠旗等人以二氯树脂为原料，进行逐个Fmoc-保护基保护的氨基酸缩合反应，合成了棕榈酰四肽-7。CN109748948B提供了一种棕榈酰四肽-7的纯化方法，使用聚苯乙烯二乙烯基苯基质的填料可同时作为棕榈酰四肽-7纯化和转盐步骤的固定相，减少了设备投入，可明显降低生产成本，纯度高且收率好，可以实现工业化生产的需求。

但是棕榈酰四肽-7由于含有棕榈酰基(Pal)以及多个疏水性氨基酸，造成其水溶性极差。而多肽在固相合成以后，往往需要采用反向色谱进行制备纯化，才能达到较高的纯度指标。而由于棕榈酰四肽-7水溶性差，造成在反向纯化过程中极易析出或者由于溶解性差，上样浓度低，造成纯化效果差，纯度往往很难提高，这也是CN109748948B专利中上样量很小的原因。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了多肽的制备方法，解决棕榈酰四肽-7由于溶解性差而不易得到高纯度产品的问题。本发明通过在棕榈酰四肽-7上临时增加一个亲水性片段，提高其水溶性，易于纯化分离。然后再将片段脱除，从而得到高纯度的棕榈酰四肽-7。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了多肽的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：偶联多个亲水性的氨基酸，获得可溶性肽片段；

步骤2：基于所述可溶性肽片段，按照所述多肽的序列依次偶联其余氨基酸，获得含可溶性肽片段的多肽树脂；

步骤3：裂解脱除所述多肽树脂得到粗肽，纯化得到精肽；

步骤4：取所述精肽在碱溶液中水解，获得所述多肽。

在本发明的一些具体实施方案中，所述亲水性的氨基酸包括非电离极性侧链氨基酸、酸性侧链氨基酸或碱性侧链氨基酸中的一种或多种。

在本发明的一些具体实施方案中，所述非电离极性侧链氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺中的一种或多种；所述酸性侧链氨基酸包括谷氨酸、天冬氨酸中的一种或多种；所述碱性侧链氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸中的一种或两种。

在本发明的一些具体实施方案中，所述多肽为难溶性多肽，所述多肽包括棕榈酰四肽-7。