[发明专利]一种肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物及其制备与应用

权利要求书

1.一种肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物，其特征在于：由亲水的丝胶蛋白、疏水的喜树碱和具有肿瘤靶向特性的生物素组成，每相邻的两个部分中间由二硫键连接；所述的丝胶蛋白、喜树碱和生物素的质量比为10～200：1～2：1～2，平均每一百个氨基酸单元二硫键含量在10％～30％。

2.权利要求1所述的肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.胱胺化丝胶蛋白衍生物的制备：将干燥的丝胶蛋白粉末分散于超干DMSO溶剂中，搅拌至充分溶解，溶液澄清透亮，加入活化剂CDI活化，加入去离子水，猝灭没有反应的CDI；加入胱胺水溶液，继续反应，反应结束在纯水中透析除去有机溶剂和水溶性杂质，冷冻干燥得到胱胺化丝胶蛋白衍生物；

S2.含二硫键基团的喜树碱衍生物的制备：将喜树碱和酰氯化试剂溶于干燥的良溶剂中，惰性气体氛围下，加入催化剂DMAP活化，然后加入双(2-羟乙基)二硫醚反应，洗涤，纯化，重结晶，得到含二硫键基团的喜树碱衍生物；

S3.含喜树碱和生物素基团的肿瘤靶向丝胶蛋白衍生物的制备：首先活化S2得到的含二硫键基团的喜树碱衍生物，然后加入S1得到的胱胺化丝胶蛋白衍生物，得到含喜树碱基团的丝胶蛋白衍生物，然后与活化的生物素反应，得到含喜树碱和生物素基团的肿瘤靶向丝胶蛋白衍生物，即为所述的肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤S1中所述的丝胶蛋白的分子量控制在3万～4万Da；

步骤S1中所述的CDI的用量为丝胶蛋白粉末质量的0.2～1倍，所述的胱胺的用量为丝胶蛋白粉末质量的0.5～2倍；

步骤S1中所述的活化的时间为12～48h；

步骤S1中所述的继续反应的时间为24h；

步骤S1中所述的透析是指用截留分子量为3500～10000Da的透析袋进行透析；

步骤S1中，加料条件为4～10℃。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤S2中所述的酰氯化试剂为三光气或二氯亚砜，用量为喜树碱摩尔分数的30％～70％；

步骤S2中所述的良溶剂为甲苯或二氯甲烷；

步骤S2中所述的洗涤的具体操作为：用0.1mol/L的盐酸洗涤三到五次，饱和氯化钠溶液洗涤一到两次，蒸馏水洗涤三到五次；

步骤S2中所述的纯化的具体操作为：分离有机相，用无水硫酸镁干燥3～4小时，减压蒸馏除去有机溶剂，过硅胶柱纯化；

步骤S2中所述的重结晶的具体操作为：用氯仿-甲醇混合溶剂重结晶。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤S3中所述的含二硫键基团的喜树碱衍生物的用量为胱胺化丝胶蛋白衍生物质量的1％～10％，活化含二硫键基团的喜树碱衍生物选用活化剂CDI，CDI的用量为含二硫键基团的喜树碱衍生物摩尔分数的5％～20％；

步骤S3中所述的反应的时间为12～48h；

步骤S3中所述的生物素的用量为含喜树碱基团的丝胶蛋白衍生物质量的1％～10％；

步骤S3中活化生物素选用EDC·HCl和NHS。

6.权利要求1所述的肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物在作为抗肿瘤药物载体上的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

所述的药物载体为纳米药物载体，进一步为胶束、微乳、微球和纳米粒子中的一种或两种以上组合。

8.一种肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药纳米粒子的制备方法，其特征在于：

将权利要求1所述的肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药衍生物的DMSO溶液转移至透析袋中，在水中透析，过滤，得到肿瘤靶向的氧化还原敏感丝胶蛋白前药纳米粒子。