[发明专利]一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用。本发明利用反向遗传操作技术，以血清2型禽副粘病毒Y2株的全基因组转录质粒为骨架，将其F和HN基因的胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基因的胞外域，通过病毒拯救，获得重组嵌合病毒。该疫苗株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:202052。该嵌合病毒可以用于我国主要流行的基因VII新城疫的防控。同时，该嵌合病毒不含有新城疫病毒NP蛋白，其免疫鸡后不会产生针对新城疫病毒NP蛋白的抗体。以常规的新城疫病毒NP抗体ELISA检测方法对rY2‑HB疫苗株免疫鸡群进行抗体检测，可实现特异检测临床野毒株产生的NP抗体，排除疫苗毒株产生的抗体干扰，有利于新城疫的监测与净化。

技术领域

本发明属疫苗基因工程领域，具体涉及一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2-HB株及其制备方法。更具体地，本发明涉及到利用反向遗传操作技术，将血清2型禽副粘病毒Y2株的F和HN基因胞外域分别替换为基因VII型新城疫病毒株的F和HN基因胞外域，获得嵌合病毒rY2-HB株，以及该毒株在基因VII新城疫标记疫苗方面的应用。

背景技术

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽的一种高度接触性传染病，严重危害全球养禽业。其典型症状为高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。我国ND的防控以疫苗免疫预防为主。LaSota、V4、Clone-30等传统ND疫苗株在新城疫防控中起到了重要作用。但由于近年来在我国流行的ND以基因VII型为主，与当前广泛使用的LaSota株等疫苗在抗原匹配性方面存在明显的差异，以致临床带毒现象比较普遍。基因VII型ND疫苗的成功研发为我国基因VII ND的防控提供了有利支撑。但此类疫苗在接种后会对ND的血清学监测带来干扰，疫苗接种后动物体内会产生ND抗体，临床野毒感染后动物体内同样会产生特异性抗体。常规的血清学方法，如血凝抑制、ELISA、胶体金等方法，都不能很有效的区分疫苗免疫和临床野毒感染。因此，研发ND标记疫苗及配套鉴别诊断技术是当前ND防控技术研究的重要方向。

NDV属副黏病毒科、禽副粘病毒属。禽副粘病毒(Avian Paramyxovirus,APMV)的血清型有9个，APMV-I～APMV-IX，其中新城疫病毒是APMV-I的唯一成员。APMV基因组按照3'-NP-P-M-F-HN-L-5'，依次编码6种结构蛋白，即核衣壳蛋白(nucleoprotein，NP)、磷蛋白(phosphoprotein，P)、基质蛋白(matrix protein，M)、融合蛋白(fusion protein，F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemaggulatinin-neuraminidase，HN)和大分子量聚合酶蛋白(Largeprotein，L)。NP蛋白的基因编码区长度均为1467bp，编码489个氨基酸，相对分子质量为56kDa。NP蛋白与P和L蛋白结合包裹基因组RNA形成一个螺旋的核糖核蛋白(RNP)复合体，参与病毒基因转录和基因组复制。NP蛋白在APMV的各个血清型中高度保守，含量丰富，具有较好的免疫原性，且NP蛋白抗体不具有病毒中和效果。因此，NP蛋白是设计ND标记疫苗的首选靶标。

NDV反向遗传学的快速发展使得对NDV进行点突变修饰、插入外源基因、基因片段互换等基因操作成为可能。关于新城疫标记疫苗和反向遗传操作技术的文献有一定的报道，但均未涉及到通过基因替换的方法研发新城疫标记疫苗的报道。

发明内容

本发明为解决上述技术问题提供一种基因VII型新城疫标记疫苗株及其制备方法与应用。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种基因VII型新城疫标记疫苗株副粘病毒II型rY2-HB株，该毒株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：V202052，保藏时间为8月28日。