[发明专利]一种通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法

权利要求书

1.一种通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建携带血管内皮生长因子A的重组病毒载体，并调整病毒滴度为0.5～2×10¹¹PFU/mL；

(2)将动物麻醉后悬挂固定，然后照射其颈部，并打开其口腔然后插入气管导管，再将病毒经气管导管注入至动物肺组织中，然后接入呼吸机直至动物清醒，最后拔除气管导管即可。

2.根据权利要求1所述的通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法，其特征在于，所述重组病毒载体为重组腺病毒载体，其包括元件顺序为CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP的载体质粒GV314，以及辅助包装质粒。

3.根据权利要求1所述的通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法，其特征在于，所述气管导管的制备过程为：

取4.5F头皮针，去除延长管，使针芯前端连接PE50导管，连接后导管超出针芯1.5～2.0cm；再截取1.9F中心静脉导管针芯前端，插入头皮针内部，其插入深度不超过PE50导管前端。

4.根据权利要求1所述的通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法，其特征在于，所述动物模型为新生大鼠模型或成年大鼠模型。

5.根据权利要求1或4所述的通过气管内途径转染的基因在肺组织中高表达的动物模型的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体过程为：

(1)腹腔麻醉大鼠后，采用前门齿悬挂、背部紧贴的方式将其固定于三角支架上，然后用LED灯照射其颈部；

(2)从大鼠左侧嘴角拉出其舌体，然后将气管导管插入声门部位，再经气管导管用移液枪注入重组病毒，注入量为25μL/只，然后连接上频率为90～100次/分，潮气量为4～6mL/kg的呼吸机，待大鼠清醒后撤除，再拔除气管导管即可。