[发明专利]基于凝血的细胞外囊泡捕获技术

权利要求书

1.一种基于凝血的用于捕获细胞外囊泡的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含带负电荷或亲水的材料；以及任选地，足以允许发生凝血级联的组分。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述带负电荷的材料或亲水材料为可以促进凝血的带负电荷的材料或亲水材料；任选地，所述带负电荷的材料或亲水材料为在血浆的生理条件下带负电荷或亲水的材料，例如在表面带负电或亲水的固体支持体，例如带负电荷或亲水的磁珠、SiO₂珠、乳胶珠等球状材料，带负电荷或亲水的玻璃纤维膜、硅胶模、硝酸纤维素膜等多孔膜结构，带负电荷或亲水的微流控通道或采用蚀刻或微纳加工等工艺制备的高比表面积材料以及色谱柱、过滤柱等高比表面积材料；

任选地所述材料含有在生理条件下带负电或亲水的基团，比如羟基、羧基、磺酸基、亚硫酸基、酰胺基、醚基等；和/或，

所述材料在表面上含有等电点7.4的蛋白质，例如血清白蛋白、胶原蛋白、酪蛋白等蛋白；或蛋白质的组合，所述组合在生理条件下带负电，例如在生理条件下带负电的等电点7.4的蛋白质与任意其他蛋白质的组合，例如在生理条件下带负电的等电点7.4的蛋白质与等电点＞7.4的蛋白质的组合，比如在生理条件下带负电的血清白蛋白和等电点＞7.4的亲和素的组合、在生理条件下带负电的血清白蛋白和等电点＞7.4的免疫球蛋白的组合等。

3. 如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述材料为在表面上含有蛋白质的磁珠，任选地所述蛋白质与磁珠的质量比为1：10000至1：10；任选地，所述磁珠为胶原蛋白磁珠、血清白蛋白磁珠或免疫球蛋白磁珠；任选地，所述磁珠用血清白蛋白进行封闭；任选地，所述用于封闭的血清白蛋白的质量体积分数为1-20 g/100 mL。

4.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于所述组分为或来源于血浆或含血浆的液体，任选地所述血浆为用EDTA、枸橼酸钠、柠檬酸钠、草酸钾/氟化钠等抗凝剂采集的血浆，任选地所述血浆为人血浆、其他动物血浆或合成血浆。

5.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还含有促进凝血发生或促进细胞外囊泡与上述材料结合的其他组分，例如所述其他组分为Ca²⁺、Zn²⁺以及维生素K中的一种或多种；和/或，所述试剂盒通过促进凝血发生使得所述细胞外囊泡与所述带负电荷或亲水的材料之间经由凝血因子和/或其活化后的形式例如凝血因子FI、FII、FIII、FIV、FV、FVII、FVIII、FIX、FX、FXI、FXII、FXIII等和/或其活化后的形式结合在一起，而实现细胞外囊泡的捕获。

6. 一种基于凝血的用于捕获细胞外囊泡的方法，其特征在于所述方法包括将如权利要求1-5中任一项所定义的带负电荷或亲水的材料与含细胞外囊泡的样品一起孵育，其中如果所述样品不含足以允许发生凝血级联的物质，则在存在如权利要求1-5中任一项所定义的足以允许发生凝血级联的组分的情况下进行孵育，以及其中如果所述样品含足以允许发生凝血级联的物质，则可在额外加入或不加入所述组分的情况下进行孵育；任选地，所述方法通过促进凝血发生使得所述细胞外囊泡与所述带负电荷或亲水的材料之间经由凝血因子和/或其活化后的形式例如凝血因子FI、FII、FIII、FIV、FV、FVII、FVIII、FIX、FX、FXI、FXII、FXIII等和/或其活化后的形式结合在一起，而实现细胞外囊泡的捕获。