[发明专利]肝癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途

说明书

本公开涉及一种培养肝癌类器官的方法，该方法包括将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子‑2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子‑2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。本公开提供的肝癌类器官的培养方法中，由于所采用的培养基中含有特定浓度的胰岛素生长因子‑2，该特定浓度的胰岛素生长因子‑2能够促进肝癌类器官的体外生长，因此，利用本公开提供的方法进行肝癌类器官培养时，培养成功率较高。

技术领域

本公开涉及生物医药技术领域，具体涉及一种培养肝癌类器官的方法、一种用于肝癌类器官培养的培养基、肝癌类器官及其在药物筛选、精准化用药检测及异种移植动物模型中的应用。

背景技术

原发性肝癌全球每年新发病例数高达85.4万，其中中国发病人数为46.6万，约占全球的55％。但目前，对于人类肝癌的研究，仍然缺乏可以真实再现原发性肝癌肿瘤病理生理的体外模型。

常见的肝癌细胞系，由于来自不同个体，在蛋白表达及异种移植成瘤性上具有明显差异。另外，由于肝癌细胞系在构建时转入了永生化基因，二维培养和传代过程中容易出现异化现象，使细胞系表现出与亲代肝癌细胞不同的特性，例如基因突变、生长变快、化疗敏感性增加等。此外，由于使用二维的单层细胞无法模拟出药物对细胞的渗透性能，部分药物对三维培养的细胞和二维培养的单层细胞呈现的杀伤力不同。

针对现有肝癌细胞系在进行药物筛选时准确性不高及原代肝癌组织无法在体外传代培养的问题，开发真实性更强的人源肝癌细胞模型，能够推进肝癌精准化用药及药物筛选的准确性。

发明内容

本公开的目的是提供一种培养肝癌类器官的方法、一种用于肝癌类器官培养的培养基、肝癌类器官及其在药物筛选、精准化用药检测及异种移植动物模型中的应用。

为了实现上述目的，第一方面，本公开提供一种培养肝癌类器官的方法，该方法包括：

将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；

对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。

可选地，所述待培养物中，所述肝癌组织细胞的浓度为1×10⁴～5×10⁴个/mL，所述基质胶的含量为2～15体积％。

可选地，所述培养基中还含有Advanced DMEM/F 12培养基、glutamax、青链霉素、HEPES、B27 supplement(without vitamin A)、N2 supplement、N-acetyll-cysteine、recombinant human(Leu15)-gastrin I、recombinant human FGF10、forskolin和A83-01。

可选地，以所述培养基为基准，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27 supplement(withoutvitamin A)的含量为1～10体积％，所述N2supplement的含量为0.1～5体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.1～5mM，所述recombinant human(Leu15)-gastrin I的浓度为1～50nM，所述recombinant human FGF10的浓度为50～200ng/ml，所述forskolin的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述Advanced DMEM/F 12培养基。

可选地，所述肝癌组织细胞由肝癌组织经酶解处理得到，其中，所述酶解处理包括：

将所述肝癌组织与酶解液混合，得到待酶解物；