[发明专利]聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组、试剂盒及方法。检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，加速引物IF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，加速引物IB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明聚合酶螺旋反应针对KSHV使用了4条引物，覆盖5个引物区，相对普通PCR的2条引物特异性更好，可以和巢式PCR的特异性等同。并且本发明通过KSHV基因保守区域的特异性选择，避开疱疹病毒的相似区，能特异性得识别KSHV各个亚型的毒株。通过扩增后的颜色反应就可判断目的基因的存在与否，从而完成了KSHV的定性检测。聚合酶螺旋反应扩增方法的敏感性高于普通PCR。操作简便，快速，对基层现场进行KSHV的检测工作的开展具有很好应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，尤其是涉及一种聚合酶螺旋反应快速检测KSHV（HHV-8）的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi's Sarcoma-associated Herpes Virus，KSHV）又称人类疱疹病毒-8型（Human Herpes Virus 8，HHV-8），属于γ-疱疹病毒。研究者认为KSHV与所有Kaposi肉瘤（KS）和某些淋巴增生有关，如原发性渗出性淋巴瘤和多中心性Castleman病。KSHV一般在免疫缺陷人群，如器官移植者、HIV-1感染者中存在，KS也是HIV-1患者最常见的肿瘤。KSHV一般处于潜伏期，通过检测KSHV DNA是否处于活跃复制，可以预测KS的后续发展。建立有效快速便捷的检测KSHV DNA的方法，对于基层现场开展检测KSHVDNA具有重要的意义。

目前对KSHV的检测方法主要有巢式PCR、普通PCR、免疫学抗体检测等。常规检测方法主要是病毒感染后产生抗体，通过抗体检测来进行确认，但由于KSHV感染后长期处于潜伏期，一般通过核酸检测可以确认病毒是否处于活跃复制期。以往通常是巢式PCR扩增出基因片段后进行测序从而确认KSHV DNA是否存在，此过程通过2轮PCR后需要电泳和测序，最快也需要2天的时间，时效性差，并且基因片段的确认需要专业的人使用软件进行基因分析。免疫学检测方法如ELISA法是抗体检测，该方法灵敏度高、特异性强，但由于KSHV长期处于潜伏期，抗体检测结果无法预测KS病程进展。目前应用最广泛的恒温扩增技术LAMP虽有灵敏度高、特异性强等优点，但也存在引物设计复杂、试剂价格偏高等不足。

聚合酶螺旋反应(Polymerase Spiral Reaction，PSR)技术与其他核酸扩增技术相比，只需要一个酶和一对检测引物（仅一对检测引物就能检测，如果加入加速引物可加速反应缩短反应时间），不需要精准的变温设备就可以开展检测。对于操作者来说，操作简便并且不需要特别专业的知识背景就可以解读结果。其特异性高，敏感性比普通PCR高，在一些基层现场能快速高通量进行检测，具有很好的发展前景。因此，建立一种聚合酶螺旋反应检测KSHV的方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的就是为了提供一种聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组、试剂盒及方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明第一方面提供聚合酶螺旋反应快速检测KSHV的引物组，包括检测引物Ft与检测引物Bt，检测引物Ft的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，检测引物Bt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。具体核苷酸序列如下所示：

检测引物Ft：

5’- GACACCCCCTGGGAACCAAGCTGCGAGTGCTTGACGATC -3’ (SEQ ID NO.1)；

检测引物Bt：

5’- GAACCAAGGGTCCCCCACAGCGCTCAACTGGTCGAGATC-3’ (SEQ ID NO.2)。