[发明专利]用于单基因隐性遗传病检测的探针组，试剂盒，筛查方法及其应用

权利要求书

1.一种用于单基因隐性遗传病检测的探针组，其特征在于：所述探针组依据164个基因共3343个捕获区域设计获得，所述的捕获区域如下所示：

2.一种用于单基因隐性遗传病检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有如权利要求1所述的探针组。

3.一种单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：采用权利要求1所述的探针组进行检测。

4.根据权利要求3所述的单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：所述基因筛查方法具体包括以下步骤：

(1)样品采集与提取：收集待测样品，提取基因组DNA；

(2)DNA片段化：将所述基因组DNA超声打断或者酶切至100～500bp的DNA片段；

(3)末端修复/dA尾添加与接头连接：对所述DNA片段进行末端修复/dA尾添加与接头连接得到产物，对所述产物进行纯化；

(4)杂交前扩增：将步骤(3)中的纯化产物进行PCR扩增富集、纯化，获得用于杂交捕获的DNA文库；

(5)第一次探针捕获：将所述DNA文库进行杂交前封闭，采用所述探针组进行杂交捕获；

(6)目标区域富集：将第一次探针捕获产物进行洗脱，获得捕获的靶序列，将所述捕获的靶序列进行PCR扩增，获得富集的靶序列；

(7)第二次探针捕获与目标区域富集：将富集的靶序列作为第二次探针捕获的DNA文库，重复步骤(5)和步骤(6)，对第二次目标区域富集获得富集的靶序列进行纯化，获得待测序产物；以及

(8)测序及分析：将所述待测序产物进行二代测序，采用生物信息学分析测序结果。

5.根据权利要求4所述的单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述待测样品为血斑、血液或口腔黏膜细胞。

6.根据权利要求4所述的单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述接头为Y型接头，所述Y型接头包括第一序列和第二序列，所述第一序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求4所述的单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述纯化为磁珠纯化；所述PCR扩增富集的体系为：

纯化产物14.5μL；2×高保真热启动预混液17.5μL；和标签引物混合液3μL；

所述标签引物的正向序列如SEQ ID NO.3所示，反向序列如SEQ ID NO.4所示；

所述PCR扩增富集的反应条件为：

98℃预变性45s；98℃变性15sec，60℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环12次；72℃最终延伸1min；4℃保温。

8.根据权利要求4所述的单基因隐性遗传病的筛查方法，其特征在于：在步骤(6)中，所述PCR扩增的体系为：

捕获的靶序列20μL；2×高保真热启动预混液25μL；和文库扩增引物-TS混合液5μL；

所述PCR扩增富集的反应条件为：

98℃预变性45s；98℃变性15sec，60℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环8次；72℃最终延伸1min；4℃保温。