[发明专利]特异结合卡介苗BCG的七肽、编码基因、制备方法及用途

说明书

本发明公开了特异结合卡介苗BCG的七肽、编码基因、制备方法及用途。七肽的氨基酸序列为Asn Trp Leu Gly Ser Thr Phe，其编码基因的核苷酸序列为gtccagaatg ttgccgacaca。该七肽用于BCG的靶向治疗，提高诊断灵敏度和特异性，为结核病靶向诊断提供一种新的方法。另外还可利用筛选出的多肽特异结合BCG的特点，为BCG的入膜，递送，起到主动靶向的作用，特异性结合BCG的细菌表面以达到靶向输送的作用。该七肽特异性强、亲和性高、活性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及特异结合卡介苗BCG的七肽、编码基因、制备方法及用途。

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)引起的慢性致死性人兽共患病，是一种严重威胁公共卫生安全的世界性传染病。据世界卫生组织报道，2017年，全球共有约1040万结核病例，其中新增640万例。每年约有160万死于该病，包括与艾滋病共感染的患者。但患者康复后体内仍然有少量的滞留菌，当机体处于免疫抑制状态或者免疫力低下时，滞留菌会大量增殖，并最终导致结核病的发生。此时结核病的复发，会使结核病的治疗更加困难。近年来，随着Mtb多重耐药性菌株的出现、艾滋病的共感染、结核病病原体的交叉感染、人口流动的增加以及对结核病控制的忽视等因素，使得结核病的防控难度加大。

卡介苗(BCG)仍是目前唯一被批准使用的抗结核疫苗，但其对成人的保护效果备受争议。研制新型结核病疫苗来降低结核病的感染率与发病率极为迫切和必要。结核病新疫苗的研究中，对新疫苗的研制总体策略已基本达成共识，即重点研制替代BCG的初免用疫苗、BCG接种后的加强免疫用疫苗和潜伏感染人群预防用疫苗，从而针对不同感染背景与免疫状态的人群实施精准免疫，构建全人群的结核病免疫预防体系。目前，唯一可用的结核病疫苗BCG，自1921年首次应用于人类以来，其免疫接种历史已近百年。

目前的靶向药物递送系统中的给药载体包括单克隆抗体、多肽、脂质体和纳米粒等，其中的多肽因具有高亲和性、较好的特异性和安全性的特点而受到广泛关注，目前已成为一种发展迅速且应用日益广泛的新型靶向给药载体。靶向的多肽偶联药物递送系统，首先要发现具有靶向结合活性的多肽载体，可以通过噬菌体展示肽库筛选、化学合成活性肽的方法获取靶向多肽载体。因BCG免疫保护效果的不确定性，单独用一种结核疫苗如BCG免疫通常不足以产生较好的免疫保护作用。因此，在BCG初次免疫的基础上，通过靶向药物递送系统进行加强免疫以达到增强免疫效果之目的，即初始-加强免疫策略，使得BCG可以发挥其免疫学功能。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供特异性强、亲和性高、活性好的特异结合卡介苗BCG的七肽及编码基因。

本发明另一目的是提供所述七肽及编码基因的制备方法。

本发明最后一目的是提供所述七肽及编码基因的用途。

技术方案：本发明提供一种特异结合卡介苗BCG的七肽，氨基酸序列为Asn TrpLeu Gly Ser Thr Phe，其编码基因的核苷酸序列为gtccagaatgttgccgacaca。

进一步地，所述七肽以融合蛋白的形式融合表达在噬菌体外壳蛋白PVIII或PIII的N端。

所述的特异结合卡介苗BCG的七肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)将BCG包被在平板上，封闭平板，将噬菌体展示随机七肽库加入包被和封闭后的平板中，进行至少4轮生物学淘选并测定每轮淘选后的噬菌体滴度；

(2)从至少第4轮计数平板上随机选择数珠噬菌体，挑选每一个噬菌体至OD0.5的E.coli ER2738菌液中，培养4-5h，后离心，取上清，重复两次，加入PEG-8000/NaCl对噬菌体进行沉淀，后离心，取上清，用TBS溶液溶解，得到每一个噬菌体单克隆的扩增产物；