[发明专利]测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒

说明书

本发明为测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，试剂盒包括：高尔基体蛋白R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；高尔基体蛋白R1试剂是异硫氰酸荧光素标记的抗高尔基体蛋白鼠单克隆抗体稀释液，高尔基体蛋白R2试剂是碱性磷酸酶标记的高尔基体蛋白多克隆抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素鼠单克隆抗体包被的磁微粒稀释液，高尔基体蛋白校准品液是由合成的高尔基体蛋白抗原和缓冲液组成，发光底物液是碱性磷酸酶催化的含二氧杂环乙烷的Tris‑HCl缓冲液。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，为高尔基体蛋白的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

技术领域

本发明涉及医用诊断试剂领域，特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

高尔基体蛋白(GP73)是一种包括400个氨基酸残基的跨膜高尔基体糖蛋白，定位9q21.33染色体基因组，亦称为GOLM1或GOLPH2。GP73由膜内、膜外的C-端及疏水N-3组成，跨膜结构完整。GP73在正常人中仅在胆囊上皮细胞中表达，在肝细胞中几乎不表达，但在胆管上皮细胞中有较高的表达水平。当肝脏炎症时，肝细胞GP73水平升高，肝癌细胞的GP73表达水平会明显升高。相关资料显示GP73的调节机制可能主要存在于两个过程中：一方面在肝脏慢性疾病发生、发展过程中出现；另一方面可能与肝细胞的急性损伤具有密切联系。研究表明，肝硬化、肝癌以及慢性肝炎患者的血清GP73水平均会发生一定程度的升高，且随着肝脏损伤程度的加深GP73的表达率逐渐升高，这表明GP73的表达强弱对肝脏损伤的程度具有提示作用。

当肝细胞受损或胆汁郁滞时，肝脏对高尔基体蛋白的摄取和排泄会发生异常，从而引发高尔基体蛋白代谢和循环紊乱，导致血液中的高尔基体蛋白含量升高。此外，高尔基体蛋白浓度的高低与肝细胞损害程度即胆汁酸代谢障碍程度直接相关。

用于肝癌、肝硬化的辅助诊断，可协同AFP项目对肝癌进行诊断检测，GP73对肝癌有着较高的灵敏度和特异性。

原发性肝癌是我国发病率最高的恶性肿瘤之一，癌细胞具有极强的增殖、侵袭、上皮间质转化活力且病灶局部的血管新生活力十分旺盛,容易早期发生血行转移并影响疾病的预后.在临床实践中，早期诊断肝癌并评估癌细胞血管新生、上皮间质转化的活力能够为治疗方案的制定提供依据[7]。肝癌作为癌症的第三大死亡原因，自然生存期不超过3-6个月。据统计，在我国人群中肝癌的年发病率高达37.6/10万。进展速度快、恶性程度高、预后差是导致肝癌致死率高的主要原因。

目前已知的高尔基体蛋白检测方法主要有上转发光法、酶联免疫吸附法(基于纳米金探针)、磁微粒化学发光免疫法(辣根过氧化物酶系统)。但是，这些方法都存在一定的缺陷，上转发光法稀土元素的有限性、酶联免疫吸附法自动化程度低且操作复杂繁琐，辣根过氧化物酶系统的磁微粒化学发光免疫法试剂的稳定性有待提高。

因此，目前尚需一种灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的高尔基体蛋白检测试剂盒和使用方法。

发明内容

本发明旨在开发一种灵敏度高、无污染、操作简单、特异性好并且成本低廉的一种测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

基于上述目的，本发明提供一种测定人体高尔基体蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；R1试剂为异硫氰酸荧光素标记的抗高尔基体蛋白单克隆抗体稀释液，R2试剂为碱性磷酸酶标记的抗高尔基体蛋白多克隆抗体稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素单克隆抗体包被的磁微粒稀释剂，校准品液系列为含有不同浓度高尔基体蛋白抗原的稀释液，化学发光底物液为碱性磷酸酶催化发光的底物液。

另一方案，所述R1试剂即异硫氰酸荧光素标记的抗高尔基体蛋白单克隆抗体稀释液是浓度为0.3～0.6μg/mL的异硫氰酸荧光素标记的抗高尔基体蛋白单克隆抗体经缓冲液稀释配成。