[发明专利]一株重组茂原链霉菌及其在生产谷氨酰胺转氨酶中的应用

权利要求书

1.一种重组茂原链霉菌，其特征在于，所述重组茂原链霉菌的基因组整合有1~5个谷氨酰胺转氨酶基因表达框；所述谷氨酰胺转氨酶基因表达框的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述重组茂原链霉菌以茂原链霉菌（streptomyces mobaraensis）smY2019为宿主，所述茂原链霉菌（streptomyces mobaraensis）smY2019已于2020年09月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2020507，保藏地址为中国武汉，武汉大学。

2.如权利要求1所述的一种重组茂原链霉菌的制备方法，其特征在于，当重组茂原链霉菌的基因组整合有一个谷氨酰胺转氨酶基因表达框时，所述方法包含如下步骤：

（1）通过PCR扩增获得带有酶切位点的谷氨酰胺转氨酶基因表达框；

（2）将步骤（1）获得的带有酶切位点的谷氨酰胺转氨酶基因表达框和整合型载体经酶切后连接，得到携带有一个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体；

（3）将步骤（2）获得的携带有一个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体导入茂原链霉菌中，得到重组茂原链霉菌；

当重组茂原链霉菌的基因组整合有一个以上谷氨酰胺转氨酶基因表达框时，所述方法包含如下步骤：

（1）通过PCR扩增获得带有酶切位点的谷氨酰胺转氨酶基因表达框；

（2）将步骤（1）获得的带有酶切位点的谷氨酰胺转氨酶基因表达框和整合型载体经酶切后连接，得到携带有一个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体；

（3）将步骤（2）获得的携带有一个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体经酶切，得到线性化的重组载体；

（4）将线性化的重组载体和步骤（1）获得的带有酶切位点的谷氨酰胺转氨酶基因表达框连接，得到携带有两个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体；

（5）在步骤（4）获得的携带有两个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体的基础上，重复步骤（3）~（4），得到携带有两个以上谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体；

（6）将步骤（4）获得的携带有两个谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体或步骤（5）获得的携带有两个以上谷氨酰胺转氨酶基因表达框的重组载体导入茂原链霉菌中，得到重组茂原链霉菌。

3.如权利要求2所述的一种重组茂原链霉菌的制备方法，其特征在于，所述整合型载体为pSET152质粒、pIB139质粒或pIJ8600质粒。

4.一种生产谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求1所述的重组茂原链霉菌接种至发酵培养基中进行发酵，获得含有谷氨酰胺转氨酶的发酵液，然后将含有谷氨酰胺转氨酶的发酵液进行分离，获得谷氨酰胺转氨酶。

5.如权利要求4所述的一种生产谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于，所述发酵的温度为28~32℃、转速为200~220rpm、pH为7.0~7.4。

6.如权利要求4所述的一种生产谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于，所述发酵培养基的成分包含甘油15~30 g×L^-1、酵母粉5~10 g×L^-1、胰蛋白胨15~30 g×L^-1、大豆粉15~30 g×L^-1、KH₂PO₄1~3 g×L^-1、K₂HPO₄1~3 g×L^-1以及MgSO₄1~3 g×L^-1。