[发明专利]一种改进的神经元的流式分选方法

说明书

本发明公开了一种改进的神经元的流式分选方法，具体地，本发明提供了一种分选神经元细胞的方法，包括：(a)提供一待分选样品，所述样品含有神经元细胞；(b)在垂直无电模式和无压差模式下，对所述待分选样品进行分选处理，从而对所述神经元细胞进行分选，获得经分选的神经元细胞。本发明分选获得的神经元细胞的活性和状态最好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种改进的神经元的流式分选方法。

背景技术

在神经科学领域中，成熟哺乳动物脑内组织的复杂性和细胞的异质性阻碍了特殊细胞群体的获得，精准的分离某些特异神经元是非常大的挑战，尽管有相关技术如激光捕获显微切割，可以获得活体组织某一种类细胞群，但由于费时费力限制了其广泛应用，且对于神经系统内体积较小较敏感脆弱的神经元来说，更是较少应用。

随着科学技术的发展，流式细胞仪的流体聚焦技术能够极大地提高检测灵敏度，流式细胞术是对异质细胞群体进行单细胞研究的极佳方法，其主要原理是电信号作用使液流振荡断裂形成均匀的液滴，根据分选目标该系统判断细胞是否被分选，再对选定的细胞液滴充电，带电液滴携带细胞经过高压偏转板后发生偏转，落入相应收集器中。单细胞测序得到广泛应用很大程度上也得益于流式分选技术的不断完善，然而制备成熟神经元的难度较大，存活率低，常规的流式分选并不能很好的收集到活性好的细胞。

因此，本领域迫切需要开发一种能够最大限度的保证神经元细胞的活性的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够最大限度的保证神经元细胞的活性的方法。

本发明的第一方面提供了一种分选神经元细胞的方法，包括：

(a)提供一待分选样品，所述样品含有神经元细胞；

(b)在垂直无电模式和无压差模式下，对所述待分选样品进行分选处理，从而对所述神经元细胞进行分选，获得经分选的神经元细胞。

在另一优选例中，所述神经元细胞来自下丘脑弓状核、海马体、视网膜。

在另一优选例中，所述神经元细胞选自下组：AgRP神经元细胞、DGR神经元细胞(小鼠背根神经节)、或其组合。

在另一优选例中，所述神经元细胞来源于哺乳动物、人。

在另一优选例中，所述神经元细胞来源于小鼠、大鼠、人。

在另一优选例中，步骤(b)中，所述垂直无电模式的处理条件如下：

(i)细胞不带电荷。

在另一优选例中，步骤(b)中，所述无压差模式的处理条件如下：

(i)样品压力与鞘液压力的差值为0(即样品压力与鞘液桶的压力差值为0，鞘液压力即为鞘液桶的压力)。

在另一优选例中，步骤(b)中，所述分选处理时间为10min-40min，更佳地，15min-25min。

在另一优选例中，所述分选处理包括将所述细胞重悬于神经干细胞培养基中，所述细胞浓度为5×10⁵个/mL－1×10⁷个/mL，以神经干细胞培养基的总浓度计。

在另一优选例中，所述神经干细胞培养基中，FBS的浓度为1－15％，较佳地，2－10％，以神经干细胞培养基的总浓度计。

在另一优选例中，所述神经干细胞培养基的体积为100－2000μL，较佳地，300－1000μL，更佳地，500－800μL。

在另一优选例中，所述的方法还包括：(c)对所述经分选的神经元细胞进行检测。

在另一优选例中，在步骤(c)中，所述的检测包括荧光显微镜观察、细胞测序。