[发明专利]一种利用小牛胸腺联合制备DNA和胸腺肽的方法

说明书

本发明涉及DNA和胸腺肽制备技术领域，具体涉及一种利用小牛胸腺联合制备DNA和胸腺肽的方法。本发明提供的联合制备方法包括：将小牛胸腺经蛋白酶K酶解得到酶解液，将酶解液的上清液经超滤分离后，将超滤的透过液用于分离胸腺肽，将超滤的截留液用于分离DNA。该制备方法可以小牛胸腺为原料同时制备DNA和胸腺肽，胸腺肽的提取效率高，分子量小且均一，便于人体吸收，且没有化学试剂残留，同时DNA的纯度和收率也较高，且DNA提取过程不使用有机试剂，减少了环境污染。

技术领域

本发明涉及DNA和胸腺肽制备技术领域，具体涉及一种利用小牛胸腺联合制备DNA和胸腺肽的方法。

背景技术

胸腺是机体重要的免疫器官，其功能与免疫密切相关，是T细胞分化、发育、成熟的场所。成人胸腺有助于T细胞的重建，研究表明，在获得性免疫缺陷疾病患者抗逆转录病毒治疗过程中，增加的幼稚淋巴细胞大部分是从胸腺释放的。胸腺也是内分泌器官，可以分泌胸腺激素和激素类物质，如胸腺肽。胸腺肽是胸腺组织上皮细胞分泌的分子量在10000道尔顿以下的多肽类激素，是一种重要的生物反应调节剂，可以促进淋巴细胞成熟及调节人体免疫功能，适用于原发性和继发性免疫缺陷病，对肿瘤也有很好的辅助治疗效果。

目前，胸腺肽的制备方法主要采用生物提取法，从小牛、猪等胸腺组织或肝脏中提取小分子胸腺肽。常用的生物提取法为采用反复冻融工艺使活性多肽溶出，或将pH调至酸性状态下反复冻融再加热提取胸腺肽。然而，常规冻融工艺不能充分破坏组织细胞，释放小分子肽，导致小分子肽提取率较低；酸性环境会破坏原料的有效活性成分(如引起核酸分子变性等)，不利于其他活性成分的再利用。

脱氧核糖核酸(DNA)是生物遗传物质的基础，具有多种生理功能，被广泛应用于医药、畜牧业、食品等领域。小牛胸腺中细胞核含量比重较大，DNA含量较高，且脱氧核糖核酸酶的活性较低，适用于规模化工业生产DNA。动物组织基因组DNA的提取一般通过将细胞破碎后，用氯仿-异戊醇、苯酚、SDS等蛋白变性剂分离蛋白质和DNA。该方法所得DNA纯度和收率较低，且存在有机溶剂污染的问题。目前，DNA提取过程中的蛋白质一般被作为副产物被丢弃，造成资源的浪费。

专利申请CN 105541996 A公开了一种胸腺组织提取胸腺肽、中分子量胸腺蛋白和DNA的方法，其以胸腺组织为原料，采用高温变性和反复冻融工艺，同时提取胸腺肽、中分子量胸腺蛋白和DNA。该方法虽然可同时提取胸腺肽和DNA，但是，对胸腺组织的裂解不完全，DNA和胸腺肽的提取收率均较低，DNA提取依赖有机溶剂且纯度仍有待提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用小牛胸腺联合制备DNA和胸腺肽的方法，本发明的另一目的是提供利用该方法制备得到的胸腺肽、DNA。

为实现上述目的，本发明以小牛胸腺为原料，开发联合提取DNA和胸腺肽的方法。与单一目标物的制备不同，在DNA和胸腺肽联合提取过程中，需要同时考虑DNA和胸腺肽的收率、DNA的纯度以及小分子胸腺肽的含量，兼顾DNA和胸腺肽的提取效率。本发明在研发过程中发现，相比于高温蒸煮、反复冻融的方法，酶解法能够更充分地裂解组织细胞，但是，选择不同酶对于胸腺肽的收率以及DNA的收率和纯度的影响较大，通常用于酶解法提取胸腺肽的一些内切蛋白酶、外切蛋白酶虽然能够提高胸腺肽的收率，但是，酶的选择会极大地影响DNA的收率，有些酶的反应条件会破坏DNA，很难同时保证DNA的提取收率和纯度。本发明意外地发现，利用蛋白酶K对小牛胸腺组织进行酶解，不仅能够很好地将胸腺组织蛋白降解为胸腺肽，提高小分子胸腺肽的得率，而且还能够有效显著提高DNA的收率和纯度。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明首先提供一种联合制备DNA和胸腺肽的方法，包括：将小牛胸腺经酶解得到酶解液，将酶解液的上清液经超滤分离后，再将超滤的透过液用于分离胸腺肽，超滤的截留液用于分离DNA；其中，对小牛胸腺进行酶解使用的酶包括蛋白酶K。