[发明专利]一种快速筛选藜麦麸皮中α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

说明书

本发明公开了一种快速筛选藜麦麸皮中α‑葡萄糖苷酶抑制剂的方法，采用SPR、UPLC/MS联用技术，用SPR捕获藜麦麸皮提取物中具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，再采用液相色谱和质谱联用的方法分离鉴定出各个化合物结构，成功筛选出藜麦麸皮中18个化合物具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性，高效快捷。

技术领域

本发明涉及α-葡萄糖苷酶抑制剂领域，特别是涉及采用SPR、UPLC/MS联用技术筛选藜麦麸皮中可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的化合物的方法。

背景技术

α-葡萄糖苷酶抑制剂(alpha-glucosidase inhibitors，AGI)是用于治疗2型糖尿病的一类药物，目前已经成为单纯饮食控制不佳的2型糖尿病患者的首选药物及1型糖尿病患者使用胰岛素治疗的首选辅助药物。近年大量临床研究表明，α-葡萄糖苷酶抑制剂能够严格控制餐后血糖的升高，减轻糖尿病患者高糖环境对机体组织、器官的刺激，延缓糖耐量异常患者向2型糖尿病转化的进程，能克服传统降糖药物的一些缺点，在调节糖脂代谢、提高胰岛素敏感性、保护胰岛细胞功能及改善多种糖尿病并发症等方面具有广泛的应用前景。

目前该类药物品种少，上市应用的品种有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇等，其制备工艺繁琐成本高，合成研究进展缓慢。因此，越来越多的学者青睐于从天然产物资源中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂，以期寻找到新的安全、有效的药物。现已发现黄酮类、生物碱类、多糖类、酚类等具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

在药物的研发过程中，通常需要大规模合成大量的化合物并进行药理活性实验，筛选得到具有活性的药物。这样的筛选方式工作量较大，合成过程通常也较为繁琐。

其实，目前已有报道，一些植物提取物具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，如果能筛选、鉴定出这些植物提取物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物结构，则有望得到高活性的α-葡萄糖苷酶抑制剂，采用这种方法进行活性药物筛选，必然比常规的设计合成新化合物的方法更直接、有效。

因此，开发一种能够从具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的混合物中快速筛选、鉴定出活性化合物的结构的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速筛选藜麦麸皮中α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，采用SPR、UPLC/MS联用技术，能够对复杂体系中的化合物进行快速筛选。

藜麦具有独特的丰富、全面的营养价值，含有丰富的总酚与黄酮醇含量，具有抗氧化、免疫调节及抗癌活性。藜麦麸皮(即藜麦的外种皮)中含有大量藜麦皂苷，皂苷味苦，食用前常通过水洗或者研磨去除，所以藜麦实际加工过程中会产生大量的藜麦麸皮。

本发明发明人通过以PNPG为底物的方法测定出藜麦麸皮提取物(CQE)具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性，则其中必然含有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，但此类植物提取物的体系非常复杂，要对其中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物进行筛选、分离、鉴定的难度很大。

经过长期的不断研究和探索，发明人得到了可以成功筛选、分离、鉴定藜麦麸皮提取物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的18种化合物的方法，将藜麦麸皮提取物注入SPR系统进行配体捕获，具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物将被捕获，洗脱收集这些化合物。随后，用UPLC-Q-TOF-MS对捕获的化合物进行结构鉴定，得到了 18个化合物，8个黄酮类化合物，10个为三萜皂苷，通过化合物解析以及谱库对照推断了化合物结构，实现了藜麦麸皮中活性化合物的快速筛选。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：

提供藜麦麸皮中可作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的化合物的筛选方法，采用SPR捕获藜麦麸皮提取物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物，再采用液相色谱和质谱联用的方法分离鉴定出各个化合物结构；

液相色谱的检测条件包括：

色谱柱：waters HSS T3或等效色谱柱；