[发明专利]含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒，该试剂盒中包含结合有M2巨噬细胞抗体的磁珠、结合有寡核苷酸Oligo(dT)的磁珠、M2巨噬细胞标志物的引物、肿瘤细胞标志物的引物。本发明通过富集循环血中吞噬了肿瘤细胞的M2巨噬细胞，来辨别体内肿瘤细胞，并可进一步通过具体的肿瘤细胞标志物来判断肿瘤类型，实现肿瘤早筛、早诊和肿瘤发展全过程的检测，特别是使得对肿瘤发展全过程的监控成为可能，可通过检测后针对性地制定肿瘤治疗方案，有利于提高肿瘤患者的生存率。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种肿瘤检测试剂盒，具体涉及一种含有肿瘤标志物的M2巨噬细胞检测试剂盒及其应用。

背景技术

在医学领域，进行人体组织活检确定肿瘤的性质，已经成为一门社会共知的科学知识。活检的顾名思义就是获取活体组织，然后再进行病理切片，确定肿瘤的性质成为肿瘤诊断的金指标之一。病理切片也是诊断肿瘤最有效的手段，一直以来，备受医务工作者们的“青睐”。同时，组织活检也存在着巨大的缺憾，即取过活检的恶性肿瘤组织极易发生肿瘤的转移；取过活检的内脏组织也存在着出血需要处理的紧急情况以及取材未能取到肿瘤细胞，不能明确诊断的可能。

鉴于上述的问题和缺陷，研究人员一直在探索和寻求更好的办法。被国际医学界评为全球“2015年十大突破技术”的液体活检技术成为人们新的推崇对象。所谓液体活检技术是相对于人体组织活检技术而言，液体活检是指通过采集人体液体样本，如：血液、尿液、唾液、胸腔积液、脑脊液等对癌症等疾病做出分析诊断的技术。目前公认的技术内容：包括了静脉血中肿瘤细胞的检测，称之为：CTCs(circulating tumor cells)；循环血中肿瘤DNA检测技术，称之为ctDNA(circulating tumor DNA)以及外泌体检测技术。液体活检技术的优势是通过采集静脉血样本，对提取的肿瘤细胞和提取的肿瘤DNA进行检测后作出诊断，样品来源容易，创伤性小，弥补了组织活检技术的缺陷与不足。

1869年，澳大利亚病理学家John Ashworth首次发现CTCs，他在死去的肿瘤患者的尸检中发现了循环血中的肿瘤细胞，并且推测其对于肿瘤本身具有影响：1960年科学家发现了多个CTCs聚集在一起的CTC簇。而随着1994年Cell Search系统的研发成功，大量的临床实验展现了CTCs在癌症预后复发效用上的应用，随着单细胞测序技术的进展，对于CTCs单细胞测序的研究也大量开展，而未来CTCs及相关检测技术将应用于肿瘤个体化精准医疗方案的制定。

到目前为止，CTCs检测技术的优势明显，在5ml肿瘤患者的静脉血中，肿瘤细胞的最低检出量达到2个(人体全血量以5000ml计算)，对于开展肿瘤的早筛、早诊以及肿瘤的治疗前后、耐药性和远端转移的发展全过程的检测有重要的意义。

但是，CTCs的检测目前存在着几个主要的问题：

第一、费用高

CTCs检测对单一瘤种的检测的精准度和效果最好，如现在已能准确的完成乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、大肠癌、胰腺癌的精准检测。CTCs检测可根据不同瘤种的不同基因变异特点逐步进行研发。但是每次的CTCs检测只能确定一个瘤种，对于早筛早诊，单一瘤种CTCs检测只能确定或排除是否带有该肿瘤细胞，而不能确定或排除是否带有其他种类肿瘤细胞，要进行全部瘤种的CTCs检测，需要一个瘤种一个瘤种地进行CTCs检测，这给检测者带来非常大的经济负担，不利于肿瘤的早筛早诊工作的开展。

第二，精准度受限

CTCs涉及上皮组织来源的肿瘤检出的精准度高，但其出现的上皮细胞间质化的问题、对EpCAM标记蛋白不敏感的上皮细胞，都容易出现一定的假阴性率，虽然较低，但还是有，这给患者预后检测带来了风险。

第三，治疗的广泛性受到影响