[发明专利]基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片

说明书

本发明涉及一种基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片，所述作为载体的人角膜基质的平均厚度为20‑100μm，优选为20‑70μm；所述载体上具有阻隔水和促进细胞粘附的修饰层，在所述修饰层上面接种有角膜内皮细胞。本发明通过采用平均厚度更薄的人角膜基质，由此能够将一个供体材料切削为几个薄片，既发挥了供体材料的最大价值，又能为内皮膜片的构建提供了很好的支架材料。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片及其制造方法。

背景技术

角膜病是世界上仅次于白内障的第二位致盲眼病。全世界4500万盲人中，有800万为角膜病致盲，且平均每年新增150-200万例因角膜溃疡和外伤致盲的患者。角膜移植是目前严重角膜病的主要治疗手段，虽然我国的角膜病致盲患者超过100万，但每年角膜移植术不足5000例，角膜供体的缺乏一直是并越来越成为角膜移植的重要制约因素。

其中很大一部分患者为角膜内皮失代偿引起的角膜内皮盲，目前治疗这种疾病最有效的方法是进行角膜内皮移植术，然而由于角膜供体匮乏，很多患者得不到相应的治疗，如果能够采用组织工程技术构建角膜内皮植片，将大大缓解这一问题。

发明内容

为了构建建模内皮膜片，本发明提供基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片及其制造方法。为了实现本发明的目的，本发明拟采用如下的技术方案。

本发明一方面涉及基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片，所述作为载体的人角膜基质的平均厚度为20-100μm，优选为20-70μm；所述载体上具有阻隔水和促进细胞粘附的修饰层，在所述修饰层上面具接种有角膜内皮细胞。本发明通过采用平均厚度更薄的人角膜基质，由此能够将一个供体材料切削为几个薄片，既发挥了供体材料的最大价值，又能为内皮膜片的构建提供了很好的支架材料。

在本发明的一个优选实施方式中，所述载体上具有阻隔水和促进细胞粘附的层是指IV型胶原和层粘蛋白的修饰层。在将角膜基质直接放入培养基中，水份进入基质会使支架水肿，导致角膜内皮细胞附着不良，并且无法观察负载细胞状态及密度。为了解决这个问题，发明人创造性的将阻隔水进入基质的IV型胶原及利于细胞粘附的层粘蛋白(laminin)涂于基质表面，然后接种角膜内皮细胞。本发明通过将角膜内皮细胞成功的接种到基质上制备成可有效发挥功能的角膜内皮细胞植片。

在本发明的一个优选实施方式中，所述具有阻隔水和促进细胞粘附的修饰层厚度为1-5微米。

在本发明的一个优选实施方式中，由所述角膜内皮细胞形成的层的厚度为3-5微米。

在本发明的一个优选实施方式中，所述人角膜基质是通过准分子激光/角膜刀将一个供体材料的基质切削为3～5个薄片所得到的。

本发明另一方面还涉及上述基于人角膜基质为载体的角膜内皮膜片的制造方法，其包括如下步骤：

(1)通过准分子激光/角膜刀将一个供体材料的基质切削为3～5个薄片；

(2)在薄片表面加入阻隔水和促进细胞粘附的修饰层；

(3)在阻隔水和促进细胞粘附的修饰层表面培养人角膜内皮细胞。

在本发明的一个优选实施方式中，所述薄片在加入阻隔水和促进细胞粘附的修饰层之前进行杀菌消毒处理。

在本发明的一个优选实施方式中，在薄片表面加入阻隔水和促进细胞粘附的修饰层是指吸取IV型胶原及层粘蛋白溶液，滴于平铺的基质薄片表面，使得液体完全将基质薄片包裹，置于超净台内晾干，直至基质表面干燥。

有益效果