[发明专利]植物过表达荧光素酶报告基因重组载体及构建方法、应用

说明书

本发明公开了植物过表达荧光素酶报告基因重组载体及构建方法、应用，涉及基因重构技术领域，所述重组载体含有pCAMBIA3301双元表达载体和插入片段；所述插入片段包括启动子、多克隆位点和荧光素酶报告基因；所述启动子的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.1所示；所述多克隆位点的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.2所示。本发明还公开了重组载体的构建方法和应用。本发明公开的重组载体解决了现有的pCAMBIA3301双元表达载体在用于过表达的时候，启动子后没有合适的酶切位点，每次插入目的基因均需要在其5’端引入CaMV35S启动子的问题，简化了目的基因的插入步骤。

技术领域

本发明基因重组技术领域，特别涉及植物过表达荧光素酶报告基因重组载体及构建方法、应用。

背景技术

pCAMBIA3301双元表达载体是进行农杆菌转化时最常用的植物表达载体之一，许多转基因研究所用的表达载体都以其为骨架。其质粒图谱见图1。

由pCAMBIA3301双元表达载体图谱可以明显看出，在多克隆位点上游没有任何启动子，因此难以应用于蛋白的过表达。该载体适合研究特定DNA顺式元件对报告基因的启动效果或增强效果，但是如果研究特定目的蛋白在植物体内的过表达时选用此系列的载体则显得非常不方便。每次在插入外源基因的时候，都必须在目的基因的之前加上CaMV35S(或被植物识别的其他)启动子，造成设计困难，难以方便快捷的插入外源基因。

发明内容

本申请的目的在于克服现有技术中pCAMBIA 3301双元表达载体用于表达植物蛋白时每次插入外源基因都需要加上启动子导致设计困难的问题，提供了植物过表达荧光素酶报告基因重组载体。

本申请还公开了植物过表达荧光素酶报告基因重组载体的构建方法。

本申请还公开了植物过表达荧光素酶报告基因重组载体的应用。

为了实现上述发明目的，本申请提供了以下技术方案：一种植物过表达荧光素酶报告基因重组载体，所述重组载体含有pCAMBIA3301双元表达载体和插入片段；所述插入片段包括启动子、多克隆位点和荧光素酶报告基因；所述启动子的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.1所示；所述多克隆位点的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.2所示。

所述荧光素酶报告基因为萤火虫荧光素酶基因LUC；所述萤火虫荧光素酶基因LUC的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.3所示。这一植物过表达荧光素酶报告基因重组载体命名为pCAMBIA3301-35S-MCS-LUC；这一插入片段命名为35S-MCS-LUC；pCAMBIA3301-35S-MCS-LUC的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.5所示。

所述荧光素酶报告基因为海肾荧光素酶基因RLUC；所述海肾荧光素酶基因LUC的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.4所示。这一植物过表达荧光素酶报告基因重组载体命名为pCAMBIA3301-35S-MCS-RLUC；这一插入片段命名为35S-MCS-RLUC。pCAMBIA3301-35S-MCS-LUC的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID No.6所示。

所述启动子、多克隆位点和荧光素酶报告基因依次连接，插入到pCAMBIA3301双元表达载体的BstE II酶切位点和EcoR I酶切位点之间。