[发明专利]万氏潜蝇姬小蜂孤雌产雌品系和两性品系的双重PCR检测方法

权利要求书

1.一种利用双重PCR快速鉴定万氏潜蝇姬小蜂孤雌产雌型和对应的两性品系两种品系的方法，其特征在于，所述方法包括使用双重PCR的引物组合对样本基因组进行PCR扩增的步骤，并对扩增产物进行检测的步骤，其中通过PCR扩增DNA样本，如有800bp扩增条带则为万氏潜蝇姬小蜂孤雌品系，如有354bp扩增条带则为万氏潜蝇姬小蜂两性品系；

所述引物组合的各引物的核苷酸序列为：

COISF引物简并序列：5’-TAAGATTTGATTATT(AG)CC(TA)CC-3’

DWAlgdCF：5’- TTTGGTTTAATCTCTCAC -3’，和

DWlgdCR：5’- ATGTAAAACAATATCAATTGAAGA -3’。

2.一种用于鉴定万氏潜蝇姬小蜂的方法，其特征在于，所述方法包括使用双重PCR的引物组合对样本基因组进行PCR扩增的步骤，并对扩增产物进行检测的步骤，其中通过PCR扩增DNA样本，如有800bp或354bp扩增条带则为万氏潜蝇姬小蜂，如果没有扩增条带则不是万氏潜蝇姬小蜂；

所述引物组合的各引物的核苷酸序列为：

COISF引物简并序列：5’-TAAGATTTGATTATT(AG)CC(TA)CC-3’

DWAlgdCF：5’- TTTGGTTTAATCTCTCAC -3’，和

DWlgdCR：5’- ATGTAAAACAATATCAATTGAAGA -3’。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PCR反应体系如下：

按扩增体系为25 µL计，其中含Mg²⁺的10×PCR Buffer 2.5 µL、10 mM 的dNTPs1µL、均为10 µM 的COISF/ DWAlgdCF/ DWlgdCR的加量比例为0.5/0.5/1µL、2.5 U/µL的 Taq聚合酶 0.2µL、模板DNA 1.0µL、超纯水补至25 µL。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PCR反应程序如下：

95 ℃预变性5 min；

35个循环：94 ℃ 30 sec，52 ℃ 30 sec，72 ℃ 45 sec；

最后72 ℃ 延伸7 min。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述对扩增产物进行检测的步骤是琼脂糖凝胶电泳。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述样本是寄生峰的卵、幼虫、蛹、或雌成虫。