[发明专利]一种评价转基因外源蛋白对蛴螬影响的生物检测方法

权利要求书

1.一种评价转基因外源蛋白对蛴螬影响的生物检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）配制转基因外源蛋白稀释液；

2）将玉米芯粉碎研磨成粒径小于100微米的颗粒，用纯净水洗净，高温高压灭菌得到玉米芯粉末备用；

3）将步骤2）处理好的玉米芯粉末加入步骤1）得到的蛋白稀释液中，在离心管中充分震荡混匀，静置，离心，取出上清液；

4）将上清液重新加入步骤3）中的离心管，重复步骤3）多次；

5）最后离心得到的沉淀即为吸附好蛋白的玉米芯粉，取出备用；

6）上清液用于蛋白含量测定，以确定蛋白实际吸附量；

7）取蛴螬置于底部铺满土壤的小烧杯中，土壤为灭菌农田土或人造土壤，厚度2-5cm，饲喂吸附好蛋白的玉米芯粉、空白玉米芯粉以及辛硫磷乳油浸泡后的玉米芯粉组，置于培养箱中饲养，观察蛴螬存活情况与体重变化情况评价转基因外源蛋白对蛴螬的影响；

所述步骤1）中的转基因外源蛋白为Cry2Ab蛋白，所述步骤1）中的转基因外源蛋白的浓度为0 .1~1mg/ml，所述步骤3）中的玉米芯粉末与蛋白稀释液的固液比为1：5~1:20g/mL，所述步骤3）中的离心转速为800-1500rpm，离心时间为2-5min，所述步骤7）中的培养箱中的培养条件为22-25℃，60-80%RH，光照12L :12D 。