[发明专利]一种同时定量植物样本中多种植物激素的方法

说明书

本发明涉及化学分析定量检测技术领域，具体涉及一种同时定量植物样本中多种植物激素的方法，包括以下步骤：样品经过液氮研磨，加入特定的提取剂提取，并在特定的色谱条件和质谱条件下采用LC‑MS/MS检测分析。本发明前处理操作简单快速，样品需要量少；可最多同时实现25种、涉及到6大类的植物激素的定量检测，采用同位素内标法，定量结果准确，重现性好；可分别应用于水稻、拟南芥、番茄、小麦等植物样本中植物激素的检测，具有广泛的适用性。

技术领域

本发明涉及化学分析定量检测技术领域，具体涉及一种同时定量植物样本中多种植物激素的方法。

背景技术

植物激素(Plant hormones，PHs)是一类对调节植物的生长和发育有着显著作用的微量有机化合物，为了研究植物激素的作用机理，需对植物体内激素组成及其含量进行测定。

目前，已报道的检测方法通常处理复杂，且通常只能检测一类植物激素或只应用于某一物种。因此，开发一种具有广泛适用性，且能同时对多种植物激素进行定量的方法至关重要。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种能够同时定量植物样本中多种植物激素的方法，该方法简单，快速，适用性广。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供了一种同时定量植物样本中多种植物激素的方法，包括以下步骤：

S1，取液氮下研磨得到的植物样本粉末，加入同位素内标的混合液和提取溶剂，混匀，离心，得到提取液，将得到的提取液浓缩后再用复溶剂复溶，得到待检测液，所述提取溶剂为甲醇、水、甲酸按照体积比为(12-15):(4-6):1制备得到混合液；

S2，分别配制预检测物质的一系列浓度梯度的植物激素标准溶液，所述标准溶液中均含有内标物；

S3，将步骤S2中制备得到的标准溶液在LC-MS/MS多反应监测模式下进行测定，以测得的目标物与其对应内标的峰面积比为纵坐标，以相应的浓度比为横坐标，绘制标准曲线；

S4，采用与步骤S3相同的方法检测步骤S1中得到的待检测液；

S5，将步骤S4中得到的待测样品多反应监测色谱图与步骤S3中得到的标准样品多反应监测色谱图进行比较，根据高效液相色谱-质谱获得的保留时间和特征离子鉴定植物激素的种类，根据待测样品色谱峰面积结合标准曲线，即可得待测样品中各植物激素的含量；

其中，所述植物激素包括吲哚-3-乙酸、吲哚-3-乙酸甲酯、吲哚-3-丁酸、吲哚-3-甲醛、吲哚-3-甲酸、异戊烯腺嘌呤、反式玉米素、顺式玉米素、二氢玉米素、茉莉酸甲酯、茉莉酸、二氢茉莉酸、茉莉酸-异亮氨酸、水杨酸、脱落酸、赤霉素1、赤霉素3、赤霉素4、赤霉素7、赤霉素9、赤霉素15、赤霉素19、赤霉素20、赤霉素24、赤霉素53。

其中，步骤S3中液相色谱的条件为：

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18柱；

流动相：流动相A为含有体积比为0.04％乙酸的超纯水溶液，流动相B为含有体积比为0.04％的乙酸的乙腈溶液；流速为0.35mL/min；柱温为40℃；进样量为2μL；

梯度洗脱程序为：

其中，步骤S3中质谱条件为：采用ESI源，温度为550℃，正离子模式下质谱电压为5500V，负离子模式下质谱电压为-4500V，气帘气为35psi。

其中，步骤S1中提取溶剂为甲醇、水、甲酸按照体积比为14:5:1制备得到的混合液。