[发明专利]利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法

权利要求书

1.利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法，其特征在于包括以下步骤：

A、种子选取；选取籽粒饱满的豆科牧草种子；选取的豆科牧草种子为白三叶海法种子和苜蓿WL168种子；

B、灭菌处理：对选取的豆科牧草种子进行灭菌处理；

C、萌发培养：将灭菌处理后的豆科牧草种子置于灭菌的蛭石上进行萌发培养至牧草种子出苗后并继续培养25天得到豆科牧草幼苗，在萌发培养的过程中，每隔1-3天浇一次水；

D、移栽：将豆科牧草幼苗移栽至若干个花盆内，具体方法如下所述：首先，选取地面以下15cm的土壤并经过筛网过滤，所述筛网的孔径为2mm，将过滤后的土壤与砂石按照重量比为1：3的比例混合后经过高温灭菌处理并冷却后作为基质，所述高温灭菌处理的温度为121℃、时间为2小时，然后向每个花盆中装入花盆体积2/3的基质并在基质表面铺撒一层丛枝菌根真菌复合菌剂，再覆盖2cm厚的基质，接着将豆科牧草幼苗移栽至每个花盆内，每个花盆内移栽的豆科牧草幼苗数量均相同且长势相同，后用注射器吸取根瘤菌菌剂按照每株牧草幼苗植物1.5-3ml的量接种根瘤菌，最后将移栽有牧草幼苗的花盆置于在温室中培养，采用随机排列法，每两周换位一次，采用自然光照，白天温度为20-30，晚上温度为15-25 ℃，在温室中培养的过程中，每隔2-3天浇一次水；移栽一周内观察牧草幼苗生长情况，若出现幼苗死亡，则选取生长良好的同种牧草幼苗进行替换；在温室中培养1个月后每周补充1次Hoagland培养液；所述丛枝菌根真菌复合菌剂采用如下方法得到：选取优质高粱种子，在生长室无菌育苗15天，准备直径为10cm的消毒塑料盆，装入2/3的基质，接着加入一层厚度为1-2cm的复合菌剂，所述复合菌剂是带有孢子、菌丝的栽培基质，其中包括根内球囊霉（Glomus intraradices）、摩西球囊霉（Glomus mosseae）和幼套球囊霉（Glomus etunicatum），然后再加入一层厚度为2cm的基质，把高粱苗移栽至消毒塑料盆中作为宿主植物，每盆4-6株，培养4个月的盆栽土即为丛枝菌根真菌复合菌剂；所述根瘤菌菌剂采用如下方法得到：选择白三叶根瘤菌ACCC18007和苜蓿根瘤菌ACCC17676先接种到YMA斜面进行活化，然后再25℃条件下恒温培养3d后转于装有YMA培养液的三角瓶中，摇床150转28度振荡48h，培养至对数生长期即可得到液体的根瘤菌菌剂，所述液体的根瘤菌菌剂含菌数为1×10⁹个/ml；所述Hoagland培养液由四水硝酸钙、硝酸钾、硝酸铵、无水磷酸二氢钾、七水硫酸镁、铁盐溶液、微量元素液组成，其组分的含量如下：四水硝酸钙1180 mg·L-1，硝酸钾505 mg·L-1，硝酸铵80 mg·L-1，pH=6.0的无水磷酸二氢钾68 mg·L^-1，七水硫酸镁493mg·L^-1，铁盐溶液22.5 mg·L^-1，微量元素液5.151 mg·L^-1。

2.根据权利要求1所述的利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法，其特征在于：在步骤B中，对选取的豆科牧草种子灭菌处理的过程如下所述：将选取的豆科牧草种子先浸泡于75%的乙醇1 min，用蒸馏水冲洗干净后，再浸泡在5 %的次氯酸钠2 min，然后用蒸馏水冲洗干净即可。

3.根据权利要求1所述的利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法，其特征在于：在步骤C中，在萌发培养的过程中，每隔2天浇一次水。

4.根据权利要求1所述的利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法，其特征在于：在步骤D中，每个花盆内移栽的豆科牧草幼苗数量为6株。

5.根据权利要求1所述的利用丛枝菌根真菌和根瘤菌促进豆科植物生长的方法，其特征在于：在步骤D中，注射器吸取根瘤菌菌剂按照每株牧草幼苗植物2ml的量接种根瘤菌。