[发明专利]间充质干细胞传代培养方法

权利要求书

1.间充质干细胞传代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）配制无血清传代培养基，所述无血清传代培养基的组分为：α-MEM培养基、血小板衍生因子、成纤维细胞生长因子和抗坏血酸；所述血小板衍生因子的浓度为10-15ng/mL；所述成纤维细胞生长因子的浓度为10-15ng/mL；

2）取原代间充质干细胞，加入到T-75有孔培养瓶中，加入所述无血清传代培养基，在37℃、5％CO₂培养箱中进行培养，待细胞融合度达到80%-90%时，用胰蛋白酶-EDTA溶液进行消化，消化完成后按1:4-5进行传代培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗坏血酸的浓度为25-50μg/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶-EDTA中胰蛋白酶的浓度为0.25mg/ml，EDTA浓度为0.04mg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无血清传代培养基还包含褪黑素，所述褪黑素的含量为2nM-200nM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中所述无血清传代培养基的加入量为10-15mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述间充质干细胞选自脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、牙髓间充质干细胞或外周血间充质干细胞。

7.无血清传代培养基，其特征在于，所述无血清传代培养基的组分为：α-MEM培养基、血小板衍生因子、成纤维细胞生长因子和抗坏血酸；所述血小板衍生因子的浓度为10-15ng/mL；所述成纤维细胞生长因子的浓度为10-15ng/mL。

8.根据权利要求1所述的无血清传代培养基，其特征在于，所述抗坏血酸的浓度为25-50μg/mL。

9.根据权利要求1所述的无血清传代培养基，其特征在于，所述无血清传代培养基还包含褪黑素，所述褪黑素的含量为2nM-200nM。