[发明专利]用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及一类用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒及其制备方法，属于肿瘤相关标志物体外诊断技术领域。解决了现有肺癌影像学诊断技术出现假性结节的不足。本发明的试剂盒，包括：链霉亲和素磁珠；吖啶酯标记的抗体或抗原；生物素标记的抗原。该试剂盒，针对肺癌影像学(LDCT)筛查出现的假性结节无法鉴别的问题，补充检测患者血液中的P53、MAGEA1、GAGE7、CAGE、GBU4‑5、SOX2和PGP9.5的自身抗体，进行肺癌的风险评估。该方法可提高早期肺癌的检测灵敏度和特异性，是肺癌筛查的重要辅助手段。

技术领域

本发明属于肿瘤相关标志物体外诊断技术领域，具体涉及一类用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒及其制备方法。

背景技术

在癌症发病率的排行榜上，肺癌居首位。因肺癌早期就发生扩散且通常在晚期被查出，所以患者的5年生存率很低。提高肺癌生存率最有效的方法就是早发现和早治疗。肺癌筛查技术包括影像学和肿瘤标志物，随着胸部计算机断层扫描检查(Computedtomography，CT)，尤其是低剂量薄层CT(LDCT)筛查项目在中国的广泛开展，越来越多的无症状肺部磨玻璃结节(ground glass nodules，GGNs)被发现。假性结节的大量检出是LDCT筛查亟待解决的问题，需要其它辅助手段加以补充。肺癌的血液肿瘤相关标志物主要有神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和胃泌素释放太前体(ProGRP)，但是这些标志物在肺癌晚期阳性率增加，在肺癌早期不敏感。研究发现，肺癌自身抗体能在肺癌临床诊断之前5年被发现，国内一项针对肺癌早期血液生物标志物包括P53、黑色素瘤抗原(MAGEA1)、G抗原(GAGE7)、肿瘤相关基因(CAGE)、ATP结合RNA解旋酶(GBU4-5)、性别决定基因家族成员2(SOX2)和蛋白基因产物9.5(PGP9.5)的自身抗体的研究，共计纳入肺癌患者818例，结果显示肺癌组抗体浓度高于肺部良性疾病组，总体敏感性达61％，特异性达90％，研究结果表明，自身抗体谱检测可能是一项十分有价值肺癌早筛工具，可辅助影像学检验，提高早期肺癌诊断的准确率。

吖啶酯在免疫化学发光分析中的应用始于1979年，吖啶酯可以分为两大类：酰胺类和DMAE类，二者发光性能相近。吖啶酯化学发光为闪光型，在加入启动剂0.4s后发射光强度达到最大，半衰期为0.9s，2s内发光基本结束，可以实现快速检测。吖啶酯标记工艺简单，标记反应一步完成，发光过程只需要在碱性条件下，经过氧化氢氧化就可以直接发光，不需要其它发光催化剂。链霉亲和素是由链霉菌分泌的一种蛋白质，它能与生物素发生特异性结合，它们之间的结合力是目前已知的最强的非共价键结合力。链霉亲和素以同源四聚体的形式存在，每摩尔的四聚体分子可结合四摩尔的生物素分子，所以在免疫检测领域具有信号放大作用。

发明内容

针对现有肺癌影像学诊断技术假性结节出现的不足，本发明提供一类用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒及其制备方法。

为实现本发明的目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供一种用于早期肺癌筛查的自身抗体联合检测免疫化学发光试剂盒，包括：

链霉亲和素磁珠；

吖啶酯标记的抗体或抗原；

生物素标记的抗原；

所述抗体为抗人IgG抗体，抗原均为P53抗原、MAGEA1抗原、GAGE7 抗原、CAGE抗原、GBU4-5抗原、SOX2抗原或PGP9.5抗原。

优选的是，所述试剂盒包括磁颗粒反应液R1、吖啶酯标记物反应液R2和生物素标记物反应液R3；

所述磁颗粒反应液R1包括链霉亲和素磁珠、第一表面活性剂、氯化钠、第一缓冲液、第一防腐剂和第一蛋白稳定剂；