[发明专利]一种定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条及其定量检测方法

权利要求书

1.一种定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板，所述的底板表面由左至右依次设置有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

所述的硝酸纤维素膜放置在底板的中部，所述的结合垫放置在硝酸纤维素膜的左端，所述的样品垫放置在结合垫的左端，所述的吸水垫放置在硝酸纤维素膜的右端，其中，各层膜或垫之间局部重叠；

所述的硝酸纤维素膜上设有两条背景荧光条带，其中一条背景荧光条带上固定有检测线，另一条背景荧光条带上固定有控制线，所述检测线为抗C-反应蛋白的包被抗体，所述控制线包被有C-反应蛋白抗原，所述检测线采用双抗体夹心免疫模式，所述控制线采用竞争免疫模式。

2.根据权利要求1所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫按如下步骤制备：

(1)在制备的纳米金溶液中，加入0.1mol/L碳酸钾溶液，用以调节纳米金溶液的pH值，然后进行步骤(2)；

(2)在步骤(1)的溶液中加入20μL待标记的浓度为1mg/mL的C-反应蛋白抗体，漩涡混匀，然后进入步骤(3)；

(3)在步骤(2)的混合溶液中，加入50μL 10％BSA溶液，4℃封闭60min，然后在4℃的条件下，12000rpm离心20min，弃去上清液，沉淀用磷酸盐缓冲溶液复溶；

(4)将步骤(3)的复合物溶液喷涂到载体膜上，37℃条件下干燥，备用。

3.根据权利要求2所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述制备的纳米金溶液的纳米金颗粒直径为20-25nm。

4.根据权利要求2所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述纳米金溶液的pH值为8.0。

5.根据权利要求2所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液中包含1％BSA和5％蔗糖。

6.根据权利要求1所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫和样品垫均为玻璃纤维素膜。

7.根据权利要求1所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫宽度均为3mm。

8.根据权利要求1所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜的型号为Millipore HATF00010。

9.根据权利要求1所述的用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条，其特征在于，所述背景荧光条带是预先均匀涂布的罗丹明B荧光团。

10.一种用于定量检测全程C-反应蛋白的免疫层析试纸条的定量检测方法，其特征在于，具体步骤为：

用移液枪吸取待测样品，添加至检测C-反应蛋白的免疫层析试纸条的样品垫上；

待测样品发生免疫反应后，检测背景荧光免疫层析试纸条的检测线和控制线上的荧光信号值，分别记为T1和T2，通过相对荧光信号值对待检测样的浓度进行定量分析。