[发明专利]一种假单胞菌及其应用

说明书

本发明公开一种假单胞菌Pseudomonas sp.CGMCC No.20361，通过对该菌株进行形态特征观察、生理生化反应、16S rDNA序列比对，最终鉴定将其鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp.本发明菌株及其发酵滤液对苹果斑点落叶病菌、苹果褐斑病菌有拮抗活性；本发明菌株培养条件简单，其发酵滤液制备工艺简单、施用方便，具备从中开发新型、高效的苹果相关病害生防菌剂的潜力。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种假单胞菌Pseudomonas sp，还涉及该菌株及其发酵液的应用。

背景技术

苹果富含碳水化合物、维生素和矿物质等多种元素，营养价值极高。我国种植苹果的历史悠久，可追溯至魏晋时期。自19世纪70年代国外品种“大苹果”引入我国以来，因其较佳的品质而逐渐发展成为我国苹果栽培的主要品种(张玉星2003)。目前我国已成为全球最大的苹果生产和消费国，随着集约化生产程度的提高及栽培品种的过度单一化，苹果病虫害的发生也越来越普遍和严重。

苹果斑点落叶病和苹果褐斑病是我国苹果产区普遍发生且危害最为严重的病害。病害流行可导致苹果叶片大量提前脱落，严重影响果树的生长发育及苹果的产量与质量。

目前，苹果斑点落叶病和苹果褐斑病的防治主要依赖化学农药，化学防治虽成本低见效快但长期使用会带来诸如病原菌抗药性、果品农残、人体健康、环境污染等问题。因此，开发相关的生防微生物制剂并在苹果生产中逐步替代化学农药，对促进苹果产业绿色、可持续健康发展具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种假单胞菌及其应用，该菌株及其发酵液对苹果斑点落叶病菌和苹果褐斑病菌具有显著抑制效果。

一种对苹果斑点落叶病菌和苹果褐斑病菌具有拮抗活性的假单胞菌，是从中国山东省烟台市蓬莱区健康苹果树根际土壤中分离得到。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日：2020年7月15日，保藏编号：CGMCC No.20361，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。该菌株分类命名为假单胞菌Pseudomonas sp.。

本发明的假单胞菌Pseudomonas sp.的培养条件简单，在多数培养基上生长良好，在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上形成近圆形、乳白色至淡黄色菌落，边缘较为规则，中央稍隆起，不透明，菌体杆状，无芽孢，有鞭毛，革兰氏阴性。该菌为好氧菌，销酸盐还原试验无颜色变化，可液化明胶试管培养基，葡萄糖发酵反应无气泡产生及颜色变化，淀粉水解反应不产生水解圈，在加入2％的氯化钠的平板上可正常生长但不能在加入5％的氯化钠的平板上生长，在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上于4℃条件下可缓慢生长。

以该菌株的基因组DNA为模板，以细菌16S rDNA序列通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG–3’)、1492R(5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)为引物PCR扩增出约1.5kb左右的片段，测序结果表明扩增出的序列长度为1435bp，测序结果见序列表的核苷酸序列。将该菌株的16S rDNA序列提交到GenBank数据库，获得序列号GenBank NO.MT378354。将该序列与GenBank数据库收录的代表菌株的16S rDNA基因核苷酸序列进行同源性比对，结果与假单胞菌(Pseudomonas sp.)的同源性达99％，用MEGA5构建系统发育树。结合形态观察、生理生化测定及分子鉴定结果，将该菌株命名为假单胞菌Pseudomonas sp.。