[发明专利]FRT细胞株在制备筛选CaCC调节剂的制剂或试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选CaCC调节剂的制剂或试剂盒中的应用。倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L表达于胞浆中；该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性；成功构建共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；该模型可筛选CaCC调节剂，荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系；荧光变化斜率值可反映胞浆内Ca²⁺浓度，该模型可敏感检测胞浆内Ca²⁺浓度。此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使Ca²⁺浓度，为Ca²⁺信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选CaCC调节剂的制剂或试剂盒中的应用。

背景技术

第二信使是细胞内的信号转导的启动组成部件之一，主要包括：钙离子(Ca2+)、环腺苷酸(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、肌醇三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)等。Ca²⁺作为胞浆内一种普遍存在的第二信使，可调控细胞内多种重要的生理过程，如参与神经递质合成与释放，调控生殖细胞的成熟和受精，调节体内多种酶的活性等。胞浆内Ca²⁺也参与高血压、冠状动脉硬化性心脏病、阿尔茨海默病等疾病的发生。因此，胞浆内第二信使Ca²⁺一直是近来年的研究热点。目前，检测胞浆内Ca²⁺的方法主要有Ca²⁺活化的荧光蛋白检测法、荧光指示剂法、膜片钳技术等。Ca²⁺活化的荧光蛋白检测法缺点是敏感性低，荧光蛋白无法通透细胞膜，需要微注射等方法负载细胞，对技术要求高。荧光指示剂法缺点是操作繁琐，试剂耗费高，检测周期长，重复差。膜片钳技术缺点是需要特定的仪器设备，对操作人员技术要求高，成本昂贵。

发明内容

有鉴于此，本发明建立一种基于CaCC可敏感检测胞浆内第二信使Ca²⁺的细胞模型。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明还提供了FRT细胞株在检测胞浆内第二信使Ca²⁺的应用；所述FRT细胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表达；

其中，相对荧光强度变化值/slope值/斜率值与细胞内Ca²⁺浓度呈现良好的正相关；

所述相对荧光强度变化值/slope值/斜率值计算如下：

0s～1.4s的相对荧光值的平均值；

y：2.4s～14.8s与0.6s～13s做线性回归分析所得到的线性回归的结果。

本发明还提供了FRT细胞株在制备检测胞浆内第二信使Ca²⁺的制剂或试剂盒中的应用；所述FRT细胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表达；

其中，相对荧光强度变化值/slope值/斜率值与细胞内Ca²⁺浓度呈现良好的正相关；

所述相对荧光强度变化值/slope值/斜率值计算如下：

0s～1.4s的相对荧光值的平均值；

y：2.4s～14.8s与0.6s～13s做线性回归分析所得到的线性回归的结果。

本发明还提供了FRT细胞株在制备预防和/或治疗与胞浆内第二信使Ca²⁺相关疾病的药物中的应用；所述FRT细胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表达；